主题：【分享】高效液相色谱基础篇|关于离子交换色谱柱维护保养及注意事项小知识

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发表于：2024/10/09 16:07:34 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

承接上回，我们说了一下离子交换色谱柱的原理、构造、分离机制、使用过程中的注意事项及它的局限性，今天主要说说它的维护保养和相关的注意事项，色谱柱固有一死，但好的操作还是能延缓它的生命周期的。

01.离子交换色谱柱的维护

1）柱体积估算：可以使用公式V=0.68πr²L 来估算色谱柱的柱体积，其中 V 为柱体积（mL），r 为色谱柱内径（cm），L 为色谱柱长度（cm）。

2）色谱柱的柱效测试：在条件允许的情况下，对新色谱柱进行测试。

3）色谱柱平衡：新柱使用前，应先用甲醇或乙腈冲洗，然后用初始流动相冲洗，以达到平衡。

4）色谱柱保护：对于复杂样品，建议使用在线滤器或保护柱，或者使用SPE小柱进行前处理。

5）色谱柱清洗：常规清洗包括使用100%水冲洗除盐，然后用甲醇或乙腈冲洗。对于强保留污染物，可以使用高浓度缓冲盐溶液（一般不超过1M的盐浓度）清洗，再用甲醇或乙腈清洗。

6）色谱柱保存：色谱柱应在适宜的温度下保存，并且根据制造商的建议使用合适的保存液。如果长时间不用，应该用保存液进行冲洗，确保里面填料不会干涸。

7）使用保护柱：对于容易污染的样品，建议使用保护柱来延长分析柱的寿命。

8）记录维护：记录色谱柱的使用和维护历史，包括使用日期、样品类型、清洗和再生周期等。

9）更换柱子：当色谱柱性能下降，如出现峰形异常、柱效降低或分离度下降时，考虑更换新柱。

02.离子交换色谱柱的注意事项
1）pH范围：确保流动相的pH值在色谱柱指定的范围内，通常为2-8，以防止固定相水解或分解。
2）温度控制：避免长时间在极端温度下使用色谱柱，一般推荐使用温度不超过60℃。
3）样品清洁度：样品应尽可能干净，避免含有悬浮颗粒、聚合物或其他可能堵塞或污染色谱柱的物质。
4）样品溶解性：样品最好溶解在流动相或与之兼容的溶剂中，以减少柱床的污染。
5）流动相组成：流动相的组成应当新鲜配制，避免使用长时间存放的溶液，以防微生物生长或沉淀形成。
6）缓冲盐浓度：使用合适的缓冲盐浓度，避免过高的浓度可能导致的柱床污染或性能下降。
7）避免高压：在冲洗或使用过程中，避免对色谱柱施加过高的压力，这可能导致填料压缩或床层损坏。
8）避免极端条件：避免在超出色谱柱制造商规定的pH、温度或有机溶剂比例的条件下使用色谱柱。
9）定期平衡：新柱或长时间未使用的色谱柱在使用前应进行适当的平衡。

总结一下：

为了确保离子交换色谱柱的长期稳定性和高效性能，我们需要遵循一系列维护和保养的步骤。首先，我们需要了解色谱柱的基本特性，比如它的体积，这可以通过特定的公式来计算。新柱子在投入使用前应该进行柱效测试，以确保其性能符合标准。

使用前，色谱柱需要用适当的溶剂进行预冲洗，然后用流动相进行平衡，以保证分析的重现性。对于含有复杂组分的样品，建议使用保护柱或在线过滤器，以减少对分析柱的污染。

在操作过程中，我们需要注意以下几点：保持流动相的pH值在色谱柱允许的范围内，控制色谱柱的使用温度，确保样品的清洁度，以及使用新鲜配制的流动相。同时，也要避免使用过高的压力，防止超出色谱柱制造商规定的使用条件。

定期清洗色谱柱也是必不可少的，这包括使用水溶液去除盐分，接着用有机溶剂进行深度清洗。如果遇到顽固的污染物，可能需要使用高浓度的缓冲盐溶液进行处理。色谱柱在不使用时应该用推荐的溶剂保存，以防止填料干涸和性能下降。

此外，记录色谱柱的使用和维护历史对于追踪其性能变化非常重要。当色谱柱的性能下降时（如出现异常的峰形或降低的柱效），就应该考虑更换新的色谱柱了。

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