主题：【第十七届原创】做实验时如何预防违规操作？

我最开始跟着师兄细胞的时候，一点儿不懂，总错，我就写了非常详细的操作步骤，然后在脑子里不断重复，结果就顺利学会了，只是开始操作慢，熟悉了就快！这是我之前写的操作步骤：

1.准备

（1）实验前30min，打开紫外灯，正式实验时关闭紫外灯，打开风机

（2）穿实验服，戴手套，酒精擦手，擦拭培养基瓶、PBS瓶、胰酶瓶、血清瓶以及废液缸外壁，放入超净台

2.弃液

（1）取出培养瓶（皿），酒精擦拭外壁，放入超净台

（2）酒精擦手，进入超净台

（3）开盖，将盖至于火焰正前方，右手将培养液倒入废液缸

（4）培养基盖（皿）过火，盖上培养瓶（皿）

3. 冲洗

（1）取5ml枪，安装5ml枪头，枪头朝对面，置于左手边枪头盒上备用

（2）取PBS，撕下封口膜，过火，开盖，盖置于高处

（3）取5ml枪，取2ml左右PBS，加入培养皿或培养瓶中



（4）盖上瓶盖（皿盖），弃掉枪头，枪头朝对面，置于左手边枪头盒上备用，轻轻晃动培养瓶（皿），让PBS没过瓶底

（5）开盖，右手弃掉PBS

（6）瓶盖（皿盖）过火，盖上培养瓶（皿）

（7）PBS瓶盖瓶口过火，盖上PBS瓶盖，置于左手酒精灯旁

4. 消化

（1）取5ml枪头，安装5ml枪头，调节示数为2ml，枪头朝向对面，置于左手边枪头盒上备用

（2）取胰酶瓶，撕封口膜，瓶口过火后开盖，盖置于高处

（3）取5ml枪，取2ml胰酶，分别小心（不要直接打到细胞上）加入到各培养瓶中（个数据情况而定），计时2min

（4）带着5ml枪头，将5ml枪，枪头朝向对面，置于左手边枪头盒上备用

（5）胰酶瓶口和瓶盖过火后盖好，同PBS置于左手酒精灯旁

（6）将培养瓶盖（皿盖）过火后盖上



5. 取管

（1）右手拿出铝制饭盒，左手打开

（2）镊子过火，取出一支15ml离心管和离心管盖（传代+铺板的话就得取出多只离心管），置于离心管架中

（3）用手离心管盖轻轻放在离心管上，不用拧紧

6. 终止消化

（1）取1ml枪，安装1ml枪头，置于左手边备用（如果血清太少，枪头伸不进去，就用5ml枪头取血清）

（2）取血清，撕下封口膜，过火，开盖置于离心管架中备用，盖置于高处

（3）打开培养瓶盖

（4）取1ml枪，取几滴血清，加入到培养瓶（皿）中，终止消化

（5）枪头朝对面，将1ml枪置于左手边枪头盒上备用

（6）过火，盖上血清

7. 吹打

（1）打开备用的15ml离心管的盖，盖置于高处

（2）取1ml枪，吹打悬液，轻轻从培养瓶上方将悬液打出，让其自然流到培养瓶下方

（3）认真观察培养瓶壁的膜，吹打到膜消失为止

（4）吹打完成之后将培养瓶中悬液转移到备用的15ml离心管中

（5）弃掉枪头，将枪放回枪架上

（6）管盖过火之后将装有细胞悬液的离心管盖上

8. 离心

（1）用封口膜将装有细胞悬液的离心管封口

（2）拿出超净台配平

（3）1500rpm离心5min

9. 洗瓶

（1）酒精擦拭双手，进入超净台工作区

（2）取1ml枪，安装1ml枪头，枪头朝对面，置于左手边枪头盒上备用

（3）取PBS瓶，瓶盖过火开盖

（4）取1ml枪，取1-2mlPBS，加至培养瓶（皿）中，冲洗3次后倒掉冲洗液

（5）将培养瓶盖（皿盖）过火后盖上

（6）弃掉枪头，枪放回枪架上

10. 配培养液

（1）取5ml枪，调节示数3.5，安上5ml枪头，置于左手边备用

（2）取1ml枪，安上1ml枪头，置于左手边备用，1ml枪用于取血清

（3）打开待传代的培养瓶盖

（4）取血清，撕下封口膜，开盖，盖过火后置于高处，用1ml枪取1ml血清（如枪头伸不进去就行5ml枪头），加入到各个待传代的培养瓶（皿）中，弃掉枪头，枪放回枪架上

（5）将血清盖和口过火后盖好，放回原处

（6）取培养基瓶，撕封口膜，过火开盖

（7）取5ml枪，用5ml枪取培养基，在每个待传代的培养瓶中加入7ml培养基（取两次3.5ml）

（8）将5ml枪，枪头朝对面，置于左手边枪头盒上备用（保留枪头）

（9）培养瓶口与盖过火后盖好

（10）培养基瓶口和盖过火后盖好，放回原处

（11）轻轻摇晃培养瓶（皿），使培养液没过瓶（皿）底