气相色谱-质谱法确定胆汁中玉米赤霉醇的残留物(确证法)Confirmation Of Zeranol In Bile By Gas Chromatography-Mass Spectrometry (EEC, Confirmation Method)
安全操作注意事项及急救
当使用氯化铵时,确保操作系统没有渗漏和通风良好。如果感到不适,离开实验室,呼吸新鲜空气。
引言
玉米赤霉醇(zeranol)是略带雌激素活性的合成雄激素。结构类似于天然雌激素zearalenone。zearalenone是从发霉的玉米黍中分离而得。同其他激素一样,玉米赤霉醇用于家畜的促进生长。
1 主体内容
从1988年1月1日起,欧盟各国禁止动物促生长剂的使用。为了确定农场主没有再使用玉米赤霉醇,在屠宰场通过采集胆汁,用放射免疫法进行筛选,一旦筛选呈阳性,再经
气相色谱-质谱法(GC-MS)确认(在英国)。这项工作的贯彻符合欧盟有关残留物的指令(86/469/EEC)。
2 应用范围
在英国,对胆汁中玉米赤霉醇筛选呈阳性时,用本法进一步确认。本法检测限为2 g/L。
3 参考文献
93/256/EEC欧盟决议,拟定的检测激素或甲状腺拮抗素残留物方法[OJ. No. L.118, 14.4.93. PP64-74]。
2052/V2/84文件6.11 II-4,科学兽医委员会,工作组--“残留物参考方法”,残留物测定方法建立通则。
ISO标准78/2-1982标准规划--第二部分:化学分析标准。
GC/MS确认胆汁中玉米赤霉醇的CVL标准操作程序,27th, 1990。
4 定义
玉米赤霉醇含量是指按本法测得的该物质所含玉米赤霉醇的量,不管其化学形式如何。含量以 g/kg或 g/L表达。
5 方法提要
分析方法包括六个步骤
1) 胆汁水解过夜
2) 提取柱净化
3) Double Bond-Elut柱净化
4) 衍生化
5) 柱后衍生净化
6) GC-MS分析
6 试剂
6.1 葡糖苷酶 Boechcinger Bcl (Cat No. 127051)
6.2 二氯甲烷 Fisobs Distol grade (用苯胺稳定化)
6.3 乙醚 Fisons Distol grade
6.4 石油醚 fisons Distol grade(40 - 60℃馏份)
6.5 甲醇 Fisons Distol grade
6.6 七氟丁酸丁酯(HFBA)Phase Sep Ltd (Cat NO. 940851)
6.7 提取柱 Merck BHD
6.8 Bond - Elut柱 500 mg CN, Jones Scientific (Cat NO. 611303)
6.9 Bond.- Elut柱 500 mg NH2, Jones Scientific (Cat No. 611303)
6.10 磷酸缓冲液 pH 7(0.06 mol/L)[3.3 g Na2HPO4 + 5.75 g NaH2PO4,配制成1L]
6.11 磷酸缓冲液 pH 6(1.0 mol/L) [35 g NaH2PO4 + 3 g NaH2PO4,配制成 1L]
6.12 正己烷 Distol grade
6.13 正庚烷 Distol grade
6.14 全氟三丁胺 Fimigar MAT
6.15 标准溶液 Internatwnd Minerals & Chemical Corp
用甲醇配制成1 mg/mL,然后稀释至标准,分别为: 100 g/mL,10 g/mL,1 g/mL,100 ng/mL, 10 ng/mL和1 ng/mL.
7 仪器设备
7.1 试剂瓶 20 mL
7.2 Techni Dri-block
7.3 Quick-fit 管 50 mL (MF-24)
7.4 Quick- fit expansion adaptor (34/35 - 24/29)
7.5 带盖试管 J Bibby (Cat No. 5142 - 10)
7.6 水浴
7.7 Manifold 提供脱氧的氮气
7.8 GC进样瓶和盖子
7.9 质谱计 Finnigan MAT ,与
气相联用,INCOS数据系统。
8 样品和取样程序
注意事项在6.3.1节和ISO文件78/2 – 1982中有所描述。下面注释源于 2052/VI/84 - EN的附录II。
8.1 样品属性:样品应符合64/433/EEC指令所规定的测定肉中残留物的要求。生物体液(本法为胆汁)或粪便将构成残留物检测的样品。
8.2 样品量:样品量必需足够满足本法的测试及需要时重复测试的量。对玉米赤霉醇,本法用5 mL胆汁,故样品量不得少于20 mL。
8.3 在实验室取样或包装必须有适当的标签。
8.4 在包装、保存和运输中,必须保持样品的完整性,以免影响测定结果。对于玉米赤霉醇待测样,在保存和运输中温度应低于-18℃。