透析分析和在线HPLC测定禽肉中硝基咪唑类和硝基呋喃类药物的残留量sg.3.4 Analysis with Dialysis and On-line HPLC for Determining Residues of Nitromidazoles and Nitrofurans in Poultry(chickens, ducks and turkeys) Meat
安全操作注意事项及急救:
安全
有机试剂:所有的有机试剂必须作为潜在的危险品处理,并且所有使用步骤必须在通风橱中操作。
引言
硝基咪唑类药物(本文指二甲硝嘧唑和甲硝咪乙酰胺)是使用于家禽的抗球虫剂。二硝基咪唑的最大残留限量(MRL)是10μg/kg;甲硝咪乙酰胺的最大残留限量(MRL)是2μg/kg,此两种硝基咪唑类药物具有共同的代谢产物:1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑。硝基呋喃类药物(本文指呋喃唑酮和呋喃它酮)是用于猪和家禽的抗菌剂。
1.主题内容
本工作依照残留指令(86/469/EEC)执行。
2.应用范围
本方法用于测定家禽肉中的二甲硝咪唑,甲硝咪乙酰胺以及它们共同的代谢产物1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑。该方法也包括禽肉中呋喃唑酮和呋喃它酮的监测。本方法作为一种常规监控方法,对于硝基咪唑类和1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑和呋喃唑酮的检测限是2μg/kg,对于呋喃它酮,其检测限为4μg/kg。
3.参考文献
93/256/EEC委员会指令,规定测定具有激素和甲状腺拮抗作用的物质残留的方法,[OJ.NL.118 ,14.4.93.pp64-74]
ISO标准78/2-1982对标准进行设计—第二部分:化学分析标准
ISO标准5725(1986)
Aerts,M.M.L,Beek,W.M.J. and Brinkman,U.A. Th.,(1990),J.Chromatogr.500,453~468
Elema,M.C.,Beek,W.M.J. and Keuken,H.J(1992),CF-LC. RIKILT-DLO,SOP N’ AO656. RIKILT,Wageningen,NL.
Kenkens,H.J.,Elema,M.C. Beek, W.M.J. and Boekestein,A.(1993) Proc.Euroresidues Ⅱ May 1993,PP 410-414.
4.定义
硝基咪唑类和硝基呋喃类含量是指按照所描述的方法检测,并表示为每kg实验样品中含有硝基咪唑类和硝基呋喃类药物的μg数,被检测的肉中含有的硝基咪唑类和硝基呋喃类药物的量。
5.原理
该方法所有的操作需在暗处避光操作,且由四个步骤组成:
—肉在水中均质
—离心
—用透析法进行提取物上清液的净化
—用配有UV的HPLC在320nm进行定量测定
6.材料
6.1化学试剂
6.1.1甲醇 分析纯
6.1.2乙腈 HPLC级
6.1.3无水醋酸钠
6.1.4冰醋酸
6.1.5软化水,用Milli-Q净化系统纯化(Millipore,Milford,USA)
6.2溶液
6.2.1 0.01mol/L醋酸钠-醋酸缓冲液,pH4.3。在约800mL水中溶解0.82g无水醋酸钠(6.1.3),用冰醋酸(6.1.4)调节pH值到4.3,用水稀释到1L。
6.2.2 HPLC洗脱液,用850mL醋酸缓冲液(6.2.1)与150mL乙腈(6.1.2)混合,通过0.22μm的微孔滤膜过滤,并用超声水浴脱气。该溶液在一月内稳定。
6.3标准溶液
6.3.1二甲硝基咪唑和甲硝咪乙酰胺(),1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑,由Merck公司,Shark和Dohme赠送。呋喃唑酮和呋喃它酮从美国公司获得。
6.3.2 标准贮备液:在甲醇溶液中配制浓度为100μg/mL的硝基咪唑类和硝基呋喃类药物以及1-甲基-2-羟甲基-5-硝基咪唑标准溶液作为标准贮备液,该溶液在暗处4-8℃可保存1个月。
6.3.3 稀释标准液:精密吸取1mL标准贮备液(6.3.2)于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度。
6.3.4 标准工作液: A(5ng/mL);精吸0.5mL 6.3.3溶液于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度。B(20ng/mL);精吸2mL 6.3.3溶液于100mL容量瓶中,用水稀释至刻度。
7.仪器设备
7.1 玻璃器皿
7.1.1 刻度吸管
7.1.2 玻璃离心管
7.1.3 6mL玻璃试管
7.1.4 100mL容量瓶
7.1.5 常备实验室玻璃器皿
7.2 仪器
7.2.1 自动移液管
7.2.2 分析天平
7.2.3 冷冻离心机
7.2.4 冰箱:<-18℃
7.2.5 振动混合器
7.2.6 均质器。400型Stomacher实验室混合器。(Lameris,NL)
7.2.7 滤纸(Schleicher & Schuell 5951/2; 15cm)
7.2.8 pH计
7.2.9 洗脱液过滤系统;0.22μm.(Millipore 83813)
7.3 透析装置(见示意图)
自动进样器—透析模块系统由一个232-401型自动进样器,两个自动六孔阀(Rheodyne 7010型),一个401型二级稀释器,一个Kel-F装配了CupropHan模(阻断10000-15000道尔顿)的平板透析器支架,具有370μL的供给体积和650μL的接受体积,一个能保持恒定无脉冲的流量为每分钟0.1-2mL的
液相色谱泵(305型,Gilson)组成。稀释器装配了2支 5mL注射器。进样装置的样器盘必须被冷却到4℃,并保持试验样品为4℃。