主题：【讨论】液质的血浆前处理

原文由 lichao1986(lichao1986) 发表:
UPLC柱的粒径很小，蛋白很容易堵塞柱子，对于血样的处理常采用的就是沉淀蛋白和液液萃取法，沉淀蛋白法是一种相对脏的样品处理方法，而在用UPLC/MS中测定生物样品常采用的就是液液萃取法，而且在使用乙腈：甲醇沉淀蛋白时常用3：1的比例，同血浆的比例至少在1：4左右；而且你在梯度洗脱中流动相的比例我认为不是太好，一般采用梯度，等度同时洗脱方法，而且不从0%开始，常用是在10%左右甲醇开始，而且终止比例一般在90%

原文由 littlefish77(littlefish77) 发表:

原文由 lichao1986(lichao1986) 发表:
UPLC柱的粒径很小，蛋白很容易堵塞柱子，对于血样的处理常采用的就是沉淀蛋白和液液萃取法，沉淀蛋白法是一种相对脏的样品处理方法，而在用UPLC/MS中测定生物样品常采用的就是液液萃取法，而且在使用乙腈：甲醇沉淀蛋白时常用3：1的比例，同血浆的比例至少在1：4左右；而且你在梯度洗脱中流动相的比例我认为不是太好，一般采用梯度，等度同时洗脱方法，而且不从0%开始，常用是在10%左右甲醇开始，而且终止比例一般在90%

您好，非常感谢您的指点，可是您说的液液萃取法我没有看懂，能说具体点吗？是乙腈：甲醇：血浆=3：1：4吗？谢谢！

原文由 风之彩(juju11) 发表:

原文由 littlefish77(littlefish77) 发表:

原文由 lichao1986(lichao1986) 发表:
UPLC柱的粒径很小，蛋白很容易堵塞柱子，对于血样的处理常采用的就是沉淀蛋白和液液萃取法，沉淀蛋白法是一种相对脏的样品处理方法，而在用UPLC/MS中测定生物样品常采用的就是液液萃取法，而且在使用乙腈：甲醇沉淀蛋白时常用3：1的比例，同血浆的比例至少在1：4左右；而且你在梯度洗脱中流动相的比例我认为不是太好，一般采用梯度，等度同时洗脱方法，而且不从0%开始，常用是在10%左右甲醇开始，而且终止比例一般在90%

您好，非常感谢您的指点，可是您说的液液萃取法我没有看懂，能说具体点吗？是乙腈：甲醇：血浆=3：1：4吗？谢谢！

不是萃取法，是直接沉淀法。一般来说乙腈的体积至少是血浆体积的3倍，甲醇4倍，我估计lichao的说法是将甲醇和乙腈以3：1比例混合后，然后再和血浆以4：1的比例来沉淀。不过，你用UPLC，强烈建议不要用蛋白沉淀法，很容易堵住子，不过如果你的样品量够多，可以过滤后再进样。

谢谢指点，可是我的样品量很少，就是100微升左右的血浆，怎么处理能尽量减少损失，除净蛋白呢？我原先是沉淀后用超滤离心管离心，可是离得超慢，所以想用其他更简单一点的方法，谢谢！