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主题：【第三届原创大赛】踏破铁鞋无觅处，得来……记一次SephadexLH-20在分离中的应用

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阿三

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发表于：2010/10/23 17:51:29 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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维权声明：本文为junqiwudi原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

踏破铁鞋无觅处，得来全不费工夫---记一次SephadexLH-20在分离中的应用

姜黄化学成分
中药姜黄为姜科姜黄属(Curcuma)多年生草本植物姜黄Curcuma longa L.的干燥根茎，味苦、辛、性温，归脾、肝经，具有破血行气、通经止痛之功效，主治寒凝气滞血瘀等症。化学成分主要含有二苯庚烷类，如curcumin（R1=R2=OMe）、demethoxycurcumin（R1=H，R2=OMe）、bisdemethoxycurcumin（R1=R2=H）；挥发油（类型主要为没药烷型、愈创木烷型以及吉马烷型，与姜黄属其他植物相比姜黄中的没药烷型倍半萜含量高）；Calebin类，如2002年Park等首次从姜黄中分离得到的calebin-A。

姜黄药理作用
1、抗肿瘤作用
姜黄素及其衍生物能抑制实验动物皮肤癌、胃癌、十二指肠癌、大肠癌、结肠癌及乳腺癌等的发生，显著减少肿瘤数目，缩小瘤体大小，降低小鼠黑色素瘤细胞的肺转移及淋巴细胞生长。可使人结肠癌细胞、人肾癌细胞及人肝癌细胞等出现皱缩、染色体凝集及DNA碎裂，并选择性抑制急性髓性白血病细胞HL-60，且作用强度与给药浓度及作用时间成依赖关系。
2、抗炎作用
姜黄素及姜黄挥发油对急性和亚慢性炎症模型有效。
3、肝保护作用
姜黄素和姜黄在体内和体外对各种毒物有肝保护作用，如对四氯化碳、黄曲霉毒素B-1、对乙酰胺基酚、铁和环磷酰胺诱导的小鼠、大鼠和小鸭的肝损伤都有保护作用。
4、抗氧化作用
姜黄素类为抗氧化有效成分，能清除氧自由基而发挥抗氧化活性。
5、抗老年痴呆作用
姜黄素可以阻止beta淀粉样蛋白堆积在大脑中，从而能有效预防老年痴呆症。Calebin A及姜黄素可以保护正常细胞不受beta淀粉样蛋白损伤。
6、抗HIV作用
姜黄素具有抗病毒活性，其作为HIV-1整合酶抑制剂的IC50值为40μM，同时证明了姜黄素及其衍生物可发展为抗艾滋病药物。
7、其它作用
此外，姜黄还具有降脂、抗诱变、治疗创伤、降低由于吸烟和饮酒带来的过脂质体紊乱、防止大鼠白内障、抗过敏以及抗组胺等作用。

姜黄作为传统中药具有多种功效，同时作为食品添加剂，其不仅具有着色的作用，而且兼顾医疗及保健的功能，在国际市场上享有很高声誉，是联合国粮食与农业组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）所规定的使用安全性很高的天然色素之一。其主要成分姜黄素及其衍生物是一类多效的天然活性物质，具有较强的抗肿瘤活性，其作用机制复杂多样，而且毒性小，价格低廉，药源充足，很有开发前景。

基于以上几点，我的工作就则样开展了。首先我们用80%的甲醇对姜黄药材进行了提取，将浓缩后的提取物浸膏，以硅胶拌样进行硅胶柱色谱分离。经硅胶柱色谱后的各馏分又采取了不同的针对性分离，比如开放ODS柱色谱，凝胶柱色谱，薄层制备色谱，高效液相制备等手段。

实验部分
我将要介绍的这一馏分是硅胶柱色谱的第十个流分。之后将其进行了开放ODS柱色谱的分离（因为我想用液相制备分离）。得到一馏分液相分析情况如下：

很杂对吧，但主要峰有一个，于是我就进行了高效液相制备。制备后进行了分析，图谱如下：

可以看到比以前好多了，但仍然不够纯，于是发狠将条件稍微变动又进行了一次高效液相制备，这次应该纯了吧，结果一分析，让人心里凉了半截，还是没有纯化。这次分析情况如下：

痛定思痛，我觉得做实验不要头脑发热，经过整理我发现，杂质吸收与我要分离的目标成分不一样差别很大，所以我认为杂质与目标成分极性很相似不管在正相还是反相硅胶上，但其不是一类化合物，其分子类型应该不同，所以是否可以考虑以分子量差别为分离手段的SephadexLH-20柱色谱。于是我将样品进行了凝胶柱色谱的分离。效果是让人吃惊的兴奋，在凝胶柱上，样品很明显的分为两个色带。其中第二个色带就是我要的成分，由于当时没有拍照，色带大家是看不到了。但液相分析图谱可以说的很清楚。大家请看：

有了前面的例子几天后，我又有了一个自认为挺成功的例子，经斑竹建议现在也加进来。样品在经凝胶柱前的分析图谱如下：

经凝胶柱分离后某一馏分的分析情况如下：

小结与讨论
下面谈一下本人分离纯化的感受吧，首先拿到一个植物总提物，一般量都很大，要考虑的粗砍断手段有限，一般为大孔树脂或硅胶，那就需要分析小试了，硅胶本人以为薄层分析一下足以，首先看一看死吸附是否严重，就是看用甲醇展开是不是大部分成分都能展上去，如果死吸附不严重，可选择合适溶剂进行摸条件，如果溶剂配比不同，展开情况差别明显说明硅胶分离手段可选，至于大孔，需取少许样品小试，然后看分离情况而定。如果含酚羟基之类可以考虑聚酰胺柱色谱，除色素需用凝胶柱色谱，然后还有开放ODS柱色谱，在做液相之前，本人推荐先用开放ODS柱色谱进行分离，一来利于液相条件选择，二来对色谱柱是一种保护。最后做分离纯化最好各种分离手段都用一般，使复杂的成分可以根据不同的分离原理分开。哈哈，写的不好，大家不要头疼哦。

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2010/10/23 18:09:04 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

大概看了下内容，建议将标题更改为：踏破铁鞋无觅处，得来全不费功夫~
是不是更加传神？小小建议，仅供参考~
另外，文章内容，我稍后帮你修改~

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2010/10/23 18:11:27 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
大概看了下内容，建议将标题更改为：踏破铁鞋无觅处，得来全不费功夫~
是不是更加传神？小小建议，仅供参考~
另外，文章内容，我稍后帮你修改~

嗯真的不错谢谢啦

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2010/10/23 18:18:27 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

小小建议，仅供参考：
1. 化学成分，可适当添加1-2个代表性结构
2. 药理活性，可适当详细一些
3. 将文章各部分都列出小标题，让人看了能够感觉一目了然
5. 各色谱图，请将各色谱条件补充完整，如柱子型号，流动相，流速等等方面
6. 其它

该帖子作者被版主 xiaodu2007693加 2积分， 2经验，加分理由：谢谢建议

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2010/10/23 18:19:37 Last edit by kaikaifeng

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2010/10/23 20:31:46 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

原文由 环烯醚萜(kaikaifeng) 发表:
小小建议，仅供参考：
1. 化学成分，可适当添加1-2个代表性结构
2. 药理活性，可适当详细一些
3. 将文章各部分都列出小标题，让人看了能够感觉一目了然
5. 各色谱图，请将各色谱条件补充完整，如柱子型号，流动相，流速等等方面
6. 其它

嗯好的我在好好弄一下谢谢