主题:【已应助】【违法添加专场1】:动物源性食品中瘦肉精的检测

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小猪飞飞
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                                                      【违法添加专场1】:动物源性食品中瘦肉精的检测

瘦肉精(Clenbuterol),一类动物用药的统称。任何能够促进瘦肉生长、抑制动物脂肪生长的物质都可以叫做“瘦肉精”,是一种非常廉价的药品,对于减少脂肪增加瘦肉作用非常好。瘦肉精让猪的单位经济价值提升不少,但它有很危险的副作用,轻则导致心律不整,严重一点就会导致心脏病。

这次采用了GB/T 22286-2008方法进行牛肉中瘦肉精的检测工作。

下面简述一下该方法的步骤:

  称取2.00g样本,加乙酸钠缓冲液、酶解,酶解后经震荡提取,瘦肉精溶于缓冲液中。取4ml上清分别经高氯酸、氢氧化钠调pH,再经饱和氯化钠、10ml 异丙醇-乙酸乙酯(6+4)提取,离心后的上清经氮气吹干,用5ml乙酸钠缓冲液复溶,上MCX过柱。淋洗时依次用2ml水、2ml 2%甲酸水、2ml 甲醇,抽干后用2ml 5%氨水甲醇洗脱并收集洗脱液,氮气吹干,最终用200ul 0.1%甲酸/水-甲醇溶液(95+5)。

  这个方法在过柱之前比较繁琐,包括调pH和一次液液提取。粗略算下,这个方法的绝对回收率大概在10%-20%。检出限较国标略低或相当。
 
  有几个问题:
  1.有没有更为简单的前处理方法?
  2.该方法的回收率是在10-20%吗?
  3.水解后的上清液先用高氯酸调pH至1,离心后的上清再用
氢氧化钠调pH至11的作用是什么?
    4.该国标推荐用MCX柱,有没有用其他类型小柱的?
    5.大家在样品分析时,都有检出哪些种类的瘦肉精?
    6.国标上提到低于检出限(0.5ug/kg),均视为未检出,您是如何判断检出与否的?
    7.贵实验室以哪种方式通过认证?猪肉加标盲样、标准品溶液盲样、查看文件报告?

也欢迎大家分享实验中的经验,晒晒实验图谱。

链接:
【都来说说“食品中可能违法添加的非食用物质”,哪些是您可以做的?】
http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110516/3308870/

【违法添加专场2】:辣椒粉中罗丹明B的测定http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110512/3300912/
【违法添加专场3】:食品中硼砂含量的测定http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110528/3333598/
【违法添加专场4】:台湾问题饮料中“起云剂”含DEHP,检测时该如何控制增塑剂DEHP的背景污染http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110528/3333645/
【违法添加专场5】:山西陈醋被曝市场95%为醋精勾兑,却无法检测真假,检验人员如何应对?http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20110807/3452320/
【违法添加专场6】:食品中23种色素的测定http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20111013/3584878/
【违法添加专场7】:
乳制品中三聚氰胺检测技术探讨http://bbs.instrument.com.cn/shtml/20120328/3950903/

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小猪飞飞
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实验室目前只购买了沙丁胺醇、克伦特罗、莱克多巴胺的标准品及其同位素内标。
流动相是
A0.1%甲酸水;B: 0.1%甲酸乙腈。
流动相梯度是:


MRM条件:
名称 PARDAUDPCE
克伦特罗clen277.2203.13320
   259.13017
莱克多巴胺ract302.4164.13120
   284.23216
沙丁胺醇salb240.3148.12923
   222.13416
D9-克伦特罗D9-clen286.3204.13121
   268.23319
D6-莱克多巴胺D6-ract308.4168.23222
   290.33117
D3-沙丁胺醇D3-salb243.4151.12325
   169.22416
   225.22416


牛肉2g,加标10ug/kg:
TIC图

xic图
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2011/5/20 17:19:25 Last edit by zpf20031212
semibeauty
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关注。。。
食品添加剂事件愈演愈烈,实验室最近要开很多农残兽残项目。。
yuduoling
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waraction
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小猪飞飞
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原文由 waraction(waraction) 发表:
我们做的回收率也很低。90ug/ml几乎做不出来


90ug/ml?您是指什么浓度?
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2011/5/20 12:43:38 Last edit by zpf20031212
johne0212
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1.有更简单的前处理方法,你可以参考Agilent Aplication Note 5990-7687,此方法只需要高氯酸沉淀蛋白之后,直接过SPE小柱。
2.如果你做的熟练的话,并且在SPE操作过程中没有差错,绝对回收率会在50%左右。
3.水解后调解Ph为1是为了沉淀蛋白,调节Ph为11是因为酸性条件下瘦肉精在MCX上保留不太好。
4.其他类型的阳离子复合小柱也可以用。
5.现在我们的方法只包括Clenbuterol和Ractopamine
6.这个如果你用不同LC/MS/MS,你的LoD或者CCa是要根据你的方法验证得出来的,开始我们用Agilent6430可以做到0.1ppb,现在转到Agilent6460可以做到0.02ppb,同时我们也会用到API5500,但是由于API5500柱后需要很长的管路,所以灵敏度会比6460差一点。
7.基质加标进行方法验证是可以同时考虑到基质效应的,其它的我们不会推荐的。

PS:如果你用API5000或者API5500做Clenbuterol的时候,由于辅助定性离子259.0这个Transition有很大的背景干扰,所以推荐你选择其它的辅助定性离子,这样API5500的灵敏度会比6460高的。
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johne0212
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楼主已经有Analyst的图了,我就补上Masshunter的图吧。STD 1ppb
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2011/5/20 15:06:55 Last edit by johne0212
gaohuajie12
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根据国标的方法做应该是没有问题的,用内标法定量,本人做过肉类,奶类,饲料类的基质,分别照相应国标做,均没问题。
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2011/5/20 17:32:26 Last edit by gaohuajie12
善良的鬼
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lubeyond
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我们用农业部781号公告做九种激动剂,基质标定量,2ug/kg的加标回收都在90%以上。仪器是Agilent6460的,
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