主题：【第六届原创】几种食品成分的试剂盒介绍

最近比较忙，所以这次是把几种试剂盒方法放在一起做一些简单介绍，如果以后有时间可以把其中有两个非标的方法（国内标准或文献中测定也不一样）做一些介绍，来不及就算了，国内的其它方法肯定会便宜些。这些都是从日本带过来的，不知道国内是谁代理，可以考虑给我点广告费了。

1.四种试剂盒介绍：

    这里包括了我做过的四种试剂盒：β-葡聚糖、抗性淀粉、 蘑菇及酵母葡聚糖、植酸/总磷酸，其中β-葡聚糖（燕麦和大麦中的，主要结构是（1-3）（1-4））上月已经发过详细的操作分析，这里为了完整性，还是做了一些简单地介绍。



2.测定方法：

2.1 蘑菇及酵母葡聚糖测定
    β-葡聚糖是一种复杂的多糖，以多种连接方式连接在一起，包括β--1,3-葡聚糖、β-1,4-葡聚糖和β-1,6-葡聚糖，这个试剂盒测的是（1-3）（1-6）葡聚糖含量，广泛存在于蘑菇和酵母中，传说具有抗肿瘤和免疫增强的效果。
      这个是没有标准方法的，国内采用的方法多是苯酚-硫酸法，是个测多糖的方法，跟其它多糖分辨不出来，而我查的文献中很多是酸水解后用液相色谱测定葡萄糖的含量，所以用这个试剂盒用得不多，也没查到类似文献。
    方法初看跟（1-3）（1-4）葡聚糖里面内容相似，酶，GOPOD试剂，葡萄糖标准液和葡聚糖的标准样，其实原理也差不多，把样品酶解成葡萄糖，然后测定葡萄糖的含量，不过呢，操作起来要复杂些，因为每个样都要用两次不同的酶解方法。第一个酶是把所有的葡聚糖都酶解成葡萄糖，第二个酶是酶解除（1-3）（1-6）以外的葡聚糖，然后把两次的值相减，算出（1-3）（1-6）葡聚糖的含量。


2.2 β-葡聚糖和抗性淀粉测定

      这两个都是有标准方法的，原理跟上面一样，将样品中的葡聚糖或淀粉酶解成葡萄糖，然后显色测定。但食品的成分就是复杂在这，这里说的葡聚糖是指（1,3）（1,4）-β-葡聚糖，是燕麦和大麦中的，据说主要功能是降血脂和降低胆固醇，我试过用这个方法去测酵母葡聚糖，测不出来。如果用国内标准中酸水解测多糖的方法，就没法区分这些糖了。
    淀粉含量标准方法一般用酸水解，比色，得到淀粉的含量。但我这里要测的是抗性淀粉，什么叫抗性淀粉呢？我去查了一下资料，写得很神奇，我自己的理解其实就是吃下去不消化，这样自然就有了传说中的种种减肥，降低胆固醇、将血脂的功能。含量较多的是玉米淀粉，天天吃玉米当然不会胖啦。方法是先酶解非抗性淀粉，洗涤离心后，剩下的非抗性淀粉再进行酶解。所以可以得到抗性淀粉和非抗性淀粉两个含量，当然这个方法得到的非抗性淀粉含量是与标准方法不一样的。
    下面就是各种酶，瓶子已经这么小了，里面还只有一丁点，就是稀释以后，每次还只取100μL或200μL，一点都不敢浪费的

    标准品，葡聚糖的有两个，大麦和燕麦，抗性淀粉一个。我前后买过好几盒，生产跨度有两年，标准品一直是这个含量，分析标准品可以配的，但食品标样怎么能长得含量都一样呢？


2.3 植酸/总磷酸测定
    植酸测定是有国家标准的，GB/T 5009.153，“植物性食品中植酸的测定”，食品的酸萃取液过阴离子柱，将植酸和植酸盐吸附与无机磷酸盐分开，用氯化钠溶液洗脱，洗脱液中的植酸与三氯化铁－磺基水杨酸混合液作用，产生褪色反应，植酸含量与褪色程度成正比，用分光光度计在波长500nm处测定吸光度，计算样品植酸含量。看起来好像还是不很复杂的，但分析的样品过柱分开，又没合适的指示剂，我也不知道怎么保证有效的分离，让植酸能完全吸附又能完全洗脱。
  而试剂盒就简单多了，如果说上面的东西对我来说还是有点陌生，这个我看了一下方法就明白了，钼酸铵反应测磷酸根，水质分析里经常用到。这个试剂盒比起上面的就更坑了，前面3个稍大的瓶子就是稀释后的缓冲溶液和磷酸根的标样，这个谁都会配啊，还非要漂洋过海。而钼酸铵、抗坏血酸是要我们自己配的。里面所有的过程都是用得很少的量，显色后的溶液只有1.5ml，只好在网上买了100个的微量比色皿，一次性的洗洗再用。
  方法还是用到了一种酶，酸萃取后一份酶解后测磷酸根含量（总磷），一份直接测磷酸根含量（游离磷），然后相减就得到了植酸的含量，看起来简单，关键就是这个酶要保证能让植酸变成游离磷酸了。这个方法不是标准方法，国内也就没看到类似的文献了

    操作就是相当简单了，多数时间就是在等待，酸萃取，离心，培养，显色


3.体会

3.1 天然的食品中结构成分很复杂，化学方法是把什么都破坏了，无法区分不同结构，而酶解方法则有一定的选择性。所以测抗性淀粉，酵母葡聚糖这些特征结构的含量就只能用酶解方法了。

3.2 具体的方法要针对具体的样品，曾经用酵母葡聚糖方法去测不含有酵母葡聚糖的样品，得到的数据居然是负的，而且重复测的结果还是这样。如果从化学分析角度，没有的话总值和不含酵母葡聚糖的数据应该是一样的，相减结果是0。最后我理解这个用来测酵母葡聚糖含量很高而其它葡聚糖很低的样品，而对我们这个其它葡聚糖很高而没有酵母葡聚糖的样品，用这种方法，两个数据不同的方向的系统误差导致总量反而不如分量大，所以这些接近负值的就直接认为未检出好了。

3.3 试剂盒并不见得是什么高科技，只不过把试剂按量汇总，让你使用起来简单方便。如研究用，如果自己把这些试剂配全，不仅要花时间精力，且有些试剂一瓶里面只用很少一点，以后也许就永远用不到了，但还是要花精力去管理。但如果做为品管或质控来用，还是自己配节约成本。