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毛细管电泳（CE）
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主题：【求助】关于毛细管电泳缓冲液加药物的问题

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lucklomo
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发表于：2014/05/26 10:06:28 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
我最近在用毛细管电泳淌度法测药物与蛋白结合常数，但是重现性很差，而且甚至连线性关系都没有。我就想问一下，文献上说要在缓冲液中加入不同浓度的药物、然后以蛋白进样。可是Inlet的A1，A2和Outlet的A1放的都是缓冲液，应该怎么这三瓶缓冲液都加入药物还是只要其中一瓶加入药物就可以呢？
本科生对仪器不够了解，希望各位大神能够提供些帮助和解答。谢谢！
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2014/5/26 10:48:11 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
晕，那么着急呢，到处发，呵呵。
站短里已经回复过你了：
文献的意思是药物和蛋白样品用缓冲溶液溶解进样。进样后在分离缓冲溶液中分离，分离缓冲溶液当然不能有你要分析的样品。
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lucklomo
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2014/5/26 12:46:56 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
晕，那么着急呢，到处发，呵呵。
站短里已经回复过你了：

文献的意思是药物和蛋白样品用缓冲溶液溶解进样。进样后在分离缓冲溶液中分离，分离缓冲溶液当然不能有你要分析的样品。


周末没人回就发了好几次。哈哈，见谅。

文献上说：以药物为添加剂加入运行缓冲液，这个是RL法。另外一种是将蛋白为添加剂加入运行缓冲液，即LR法。

您的意思是指先inject药物、再inject蛋白，然后在separate？separate两端为分离缓冲液，不应该加药物或蛋白？

我们现在是这样做的，inject蛋白，然后separate，separate两端的缓冲液里加入药物。
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CEcret
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2014/5/26 13:19:43 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这种方法我了解一些，正确的方法是在冲洗以及运行的buffer中都加入药物，然后通过测算蛋白峰的淌度换算结合常数。
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CEcret
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2014/5/26 13:21:48 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
而重现性差是因为蛋白与毛细管内壁存在严重的吸附作用。你应当采用涂层毛细管或者动态涂层技术来抑制蛋白的吸附。
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lucklomo
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2014/5/26 13:41:16 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 CEcret(v2812644) 发表:

而重现性差是因为蛋白与毛细管内壁存在严重的吸附作用。你应当采用涂层毛细管或者动态涂层技术来抑制蛋白的吸附。


那就是说Inlet的A1，A2和outlet A1都应该要加入药物？之前试过动态涂层，用SDS，但是效果也不是很好。我们都用断了好几根柱子了，真捉急。。。用涂层管会好很多吗？
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CEcret
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2014/5/26 15:24:41 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lucklomo(v2861366) 发表:
原文由 CEcret(v2812644) 发表:

而重现性差是因为蛋白与毛细管内壁存在严重的吸附作用。你应当采用涂层毛细管或者动态涂层技术来抑制蛋白的吸附。


那就是说Inlet的A1，A2和outlet A1都应该要加入药物？之前试过动态涂层，用SDS，但是效果也不是很好。我们都用断了好几根柱子了，真捉急。。。用涂层管会好很多吗？


你的flushing buffer和running buffer，都要加入药物。

关于涂层管，基本你只能找到进口的商品管，缺点是价格相对较高，一旦断裂，管子就废了。

我个人比较喜爱动态涂层，我用过一种很有特色的动态涂层，用来分析蛋白和多肽效果很不错，你可以参看这个实例，上图是Borate100mM pH 9.3的结果，一个大鼓包，并且如果不加大进样量，很难能看到明显的峰；下图是采用动态涂层的技术，由于峰形大幅度改善，变得很窄，进样量也得以回归正常。如果你对这样的涂层技术感兴趣，可以私信我交流。
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nini2006
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2014/5/26 18:11:24 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 CEcret(v2812644) 发表:
这种方法我了解一些，正确的方法是在冲洗以及运行的buffer中都加入药物，然后通过测算蛋白峰的淌度换算结合常数。
想起来了，你讲的这个方法应该是亲和毛细管电泳法。我们组之前有人用CZE做过蛋白质与药物的结合常数，用个透析袋做，通过测游离药物的浓度变化就可以计算出结合常数来了，特别简单。
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2014/5/27 17:19:04 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 nini2006(nini2006) 发表:
原文由 CEcret(v2812644) 发表:
这种方法我了解一些，正确的方法是在冲洗以及运行的buffer中都加入药物，然后通过测算蛋白峰的淌度换算结合常数。
想起来了，你讲的这个方法应该是亲和毛细管电泳法。我们组之前有人用CZE做过蛋白质与药物的结合常数，用个透析袋做，通过测游离药物的浓度变化就可以计算出结合常数来了，特别简单。


没错的，就是亲和电泳
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wy20071722
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2014/5/28 16:03:33 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lucklomo(v2861366) 发表:
原文由 CEcret(v2812644) 发表:

而重现性差是因为蛋白与毛细管内壁存在严重的吸附作用。你应当采用涂层毛细管或者动态涂层技术来抑制蛋白的吸附。


那就是说Inlet的A1，A2和outlet A1都应该要加入药物？之前试过动态涂层，用SDS，但是效果也不是很好。我们都用断了好几根柱子了，真捉急。。。用涂层管会好很多吗？


是这样的。
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