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主题：【讨论】酸性蛋白CIEF分析

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lingyou
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发表于：2015/06/25 08:29:30 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
最近在做几个酸性蛋白的CIEF。贝克曼的方法比较适用于中性和偏碱性的蛋白分析，对于酸性蛋白分析效果不太理想。氨水迁移法比较适合酸性蛋白，但是据说很伤柱子，做不了几个样品。讨论一下，有没有人遇到同样的问题，是怎么优化方法的呢?我尝试调整占位剂的配比，暂时也没有得到理想的结果。
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2015/6/30 16:23:18 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没有做过这方面的东西。
没查到类似的文献吗？
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lingyou
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2015/7/1 8:42:21 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ericwong(ericwong) 发表:
没有做过这方面的东西。
没查到类似的文献吗？
你是来消灭零回帖的吗～～一直在查，没有找到合适的方法
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CEcret
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2015/7/1 9:00:54 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你考察过氨水迁移法的耐久性么
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lingyou
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2015/7/1 11:02:10 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 CEcret(v2812644) 发表:
你考察过氨水迁移法的耐久性么


没有。第一次走了大概8个样品，隔两天再走图谱就不对劲了。询问了一下工程师，他说大概五针左右。我感觉没有这么脆弱，但是柱子确实状态不行了，就换了一根，没有再试这种方法。
你们有没有做过pI<4的酸性蛋白，有什么好的优化思路吗？据说醋酸法不太适用于pI<4的情况。我加大IDA的量，不加Arg结果样品根本没有峰。这是什么原因呢？
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2015/7/1 17:34:21 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lingyou(v2983592) 发表:
你是来消灭零回帖的吗～～一直在查，没有找到合适的方法


呵呵，搂草打兔子而已。
做的越具体，做过的人越少。你也提到过没有什么文献，那么只有两个可能，一个是还没有多少人做，如果是这样的话，就可以偷笑了；另一个是这个不容易做，做过的没有什么好的结果，因此没有多少文献。
既然这样，那就只有自己多努力了。试着从原理上下功夫，看看有没有解决办法；另外就是要多选体系去试验。
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CEcret
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2015/7/3 15:35:56 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ericwong(ericwong) 发表:
呵呵，搂草打兔子而已。
做的越具体，做过的人越少。你也提到过没有什么文献，那么只有两个可能，一个是还没有多少人做，如果是这样的话，就可以偷笑了；另一个是这个不容易做，做过的没有什么好的结果，因此没有多少文献。
既然这样，那就只有自己多努力了。试着从原理上下功夫，看看有没有解决办法；另外就是要多选体系去试验。

这位女士是来自生物制药企的，对发文章不感兴趣的。所以要是没有什么人做的话，绝对是笑不出来的。好在做过这个品种的人也有一些的
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lingyou
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2015/7/6 8:09:24 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 ericwong(ericwong) 发表:
呵呵，搂草打兔子而已。
做的越具体，做过的人越少。你也提到过没有什么文献，那么只有两个可能，一个是还没有多少人做，如果是这样的话，就可以偷笑了；另一个是这个不容易做，做过的没有什么好的结果，因此没有多少文献。
既然这样，那就只有自己多努力了。试着从原理上下功夫，看看有没有解决办法；另外就是要多选体系去试验。
我觉得是后者啦。主要还是经验不足，需要多加试验
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nini2006
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2015/7/6 23:12:58 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 lingyou(v2983592) 发表:
你是来消灭零回帖的吗～～一直在查，没有找到合适的方法
差矣， Eric可是本版资深专家，你提供的信息越详细越有利于网友帮助你分析和解决问题。
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CEcret
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2015/7/8 17:34:43 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
唉，你自己摸索也是挺辛苦的，也不知道你们老板怎么想的。
我可以告诉你几点：
1。选择合适的窄范围两性电解质
2。氨水迁移法，耐久性还是可以的
3。尿素浓度会影响蛋白的亚基，需要优化。

我们曾经投入不少的精力做过相关的考察，但是我只能帮你这些了。
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lingyou
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2015/7/9 8:28:55 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 CEcret(v2812644) 发表:
唉，你自己摸索也是挺辛苦的，也不知道你们老板怎么想的。
我可以告诉你几点：
1。选择合适的窄范围两性电解质
2。氨水迁移法，耐久性还是可以的
3。尿素浓度会影响蛋白的亚基，需要优化。

我们曾经投入不少的精力做过相关的考察，但是我只能帮你这些了。
如果你们开发一个方法的话，大概多少钱呢？最近有没有关于方法优化的培训啊
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