前言
某些廉价巧克力制品，通常采用代可可脂为主要成分，添加白糖，磷脂，乳清粉，脱脂奶粉，香精，着色剂等原料制成，代可可脂主要成分为氢化植物油，常温下为固态，难溶于常见有机溶剂，乳清、奶粉类蛋白制品，容易吸附色素，添加着色剂后，用GB5009.35方法难以测定，本文对某公司代可可脂奶糖样品进行检测研究。
仪器和试剂
2.1仪器
1260 高效液相色谱仪，美国安捷伦科技有限公司；高速离心机TECHCOMP,CT14D，上海天美生化仪器设备工程有限公司，上海市松江区新桥镇民益路201号16幢；高速均质机，FLUKO,FA25 model，上海弗鲁克流体机械制造有限公司，上海市恒丰路800号机电大厦16楼A区.
2.2试剂
新红；赤藓红标准品，国家标物中心，配制浓度50ug/mL,乙醇-氨水-水：7：2：1，AR级，二级水；20%柠檬酸溶液，分析纯；正己烷，分析纯；pH试纸（3.8-5.4）（5.4-7.0）, 聚酰胺粉200目
实验
3.1原理
氢化植物油碱性水解生成相应水溶性饱和脂肪酸盐及甘油，释放出吸附的染料分子。少量奶制品经深冷沉淀除去，脂类经正己烷萃取除去,色素经聚酰胺粉吸附解吸。
3.2试样处理
准确称取5.000g(准确至0.001g)碾细混均样品于25ml塑料离心管，加入10mL的乙醇-氨水-水：7：2：1溶液，于60℃水浴中水解15min,期间不断搅拌（加快可用均质），至全部溶解，然后，放入零下25℃低温冰箱冷冻2小时，沉淀蛋白，定量滤纸滤出清液，加水20mL在100℃水浴蒸发除醇（剩约20mL），冷至室温，移入柱状分液漏斗中，加正己烷10mL震荡除酯（脂类多可二次以上）,下层清液在60℃水浴中加聚酰胺粉1克，搅拌均匀，用20%柠檬酸溶液中和至PH为6.5，经3号砂芯漏斗过滤，水洗，乙醇-氨水-水10mL洗脱，如过滤较慢放入离心试管于10000r/min离心5min,取清液入蒸发皿，残渣继续用洗脱液搅拌离心提取至无色，合并清液中和后蒸发，至近干后用5mL甲醇定容，定量滤纸过滤（杂质少可不过滤），清液过PTFE滤头，上液相色谱检测。
3.3谱图
标准样品谱图（新红-赤藓红）如下：

样品峰如下：

样品中赤藓红DAD谱图如下（和标样一致）

3.4色谱条件
色谱梯度条件如下：

时间min	0	2	7	7.5	10
通道B甲醇%	10	20	75	10	10

色谱柱：ZORBAXSB-C18，4.6×150mm,30℃,流速1mL/min.
通道A为20mmol/L乙酸铵溶液，检测波长510nm,进样量10uL.
平行测定结果为0.0150g/kg,本方法检出限0.0005g/kg
3.5加标试验
在不含赤藓红的代可可脂奶糖样品中加入5mL的浓度为50ug/mL赤藓红标样,回收率为84.2%，符合检测的一般要求。

讨论
GB5009.35-2016通常只适用于液体产品及部分易溶于水的糖类制品中色素的测定，对GB/T5009.35的修改，涉及样品类别没有大的实质改动，相对于实际分析对象的基质复杂多样性，应视样品种类研究制定相应不同的方法。
参考文献
【1】吕东明，丁云连，詹晟等，常见淀粉制品中合成色素的改进测定法食品安全质量检测学报，2012.3（3）205-208
【2】黄桔颖，陈悦娇，苏燕妃，等 RP-HPLC测定软糖中的食用合成色素农产品加工*学刊2009,172（5）:70-75