最近测了几批青黛药材的含量，发现青黛药材靛蓝含量测定采用的提取溶剂是2%水合氯醛三氯甲烷溶液，并且用量较大。在上机检测过程中发现靛蓝的色谱峰出的比较宽，理论塔板数较低。我们采用靛蓝靛玉红同一处理条件进行测定，峰形变好。

1 材料

青黛药材（送检样）；甲醇（色谱级），水合氯醛，氯仿，N,N-二甲基甲酰胺（分析纯）；靛蓝、靛玉红对照品（购自中检院）。

2 仪器与设备

岛津液相LC-20AT配制DAD二极管阵列检测器，Eclipse XDB C18色谱柱(250mm*4.6μm*5μm)，超声波提取器（江苏昆山）。

3 实验方法

3.1 靛蓝测定方法

3.1.1 色谱条件

流动相（参照中国药典2015年第一部）：甲醇-水（75：25）；检测波长：606nm；柱温：35 ℃；流速：1.0mL/min，进样量：10μL。

3.1.2 对照品溶液制备

取靛蓝对照品2.5mg，精密称定，置250ml量瓶中，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液（取水合氯醛，置硅胶干燥器中放置24小时，称取2.0g，加三氯甲烷至100ml，放置，出现浑浊，以无水硫酸钠脱水，滤过，即得）约220ml，超声处理（功率250W，频率33kHz） 1.5小时，放冷，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液至刻度，摇匀，即得（每1ml中含靛蓝10μg）。

图1 按照药典方法靛蓝标准品图

3.1.3 供试品溶液的制备

取本品细粉约50mg，精密称定，置250ml量瓶中，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液约220ml，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，放冷，加2%水合氯醛的三氯甲烷溶液至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱图如下：

图2 按照药典靛蓝样品图

3.2 靛玉红测定方法

3.2.1 色谱条件

流动相（参照中国药典2015年第一部）：甲醇-水（70：30）；检测波长：292nm；柱温：35 ℃；流速：1.0mL/min，进样量：10μL。

3.2.2对照品溶液的制备

取一定量的靛玉红对照品，精密称定，加N，N-二甲基甲酰胺（DMF），超声处理使溶解，放冷，加DMF至刻度，摇匀（每1ml中含靛玉红5μg）。

图3 靛玉红标准品图

3.2.3 供试品溶液的制备

取本品细粉约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加DMF约20ml，超声处理30分钟，放冷，加DMF至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。色谱图如下

图4 靛玉红样品图

图5 按照靛玉红流动相条件下的靛蓝标准品图

图6 按照靛玉红流动相条件下的靛蓝样品图

4 结果与讨论

在测靛玉红的过程中，发现加入20mLN，N-二甲基甲酰胺,青黛药材是完全溶解的，那就想能不能同时测定青黛中的靛蓝和靛玉红，药典中的靛蓝测定使用的提取溶剂是氯仿，氯仿溶剂有毒，而且使用量250mL，用量也比较大，在药典的流动相条件下出的色谱峰比较宽，采用测定靛玉红的流动相条件进行检测，峰形对称，理论塔板数提高很多，不同的流动相条件下测定的含量一致，所以建议测靛蓝时采用测定靛玉红的流动相比例同时测定，减少污染，降低成本。