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荧光素钠为橙红色粉末,无臭,几乎无味;有引湿性,在水中易溶在乙醇中略溶,是一种化合物染料,
具有荧光特性。其分子式为(C
20H
10O
5Na
2),
相对分子质量为376.27
,在pH
为8
时荧光最强。熔点328
℃。其荧光素钠结构见Fig.1
。Fig.1 the Structure of sodiumfluorescein
本品为诊断用药,是一种染料,对正常角膜等上皮不能染色,但能对损伤的角膜上皮染成绿色,从而可显示出角膜损伤、溃疡等病变。本品流经小血管时,能在紫外线或蓝色光激发下透过较薄的血管壁和黏膜呈现绿色荧光,从而显示小血管行经和形态等,据此可供眼底血管造影和循环时间测定。荧光素钠原料药在工艺中使用了二氯甲烷,采用气相色谱法对其进行了测定。
1
残留溶剂二氯甲烷的气相色谱测定色谱柱:DB
-WAX
毛细管柱(30.0 m×0.25 mm×0.25 μm
)(Agilent
科技有限公司)
升温程序:60 ℃,保持3 min,以100 ℃·min-1的速率升温至200 ℃,保持1 min。
流 速:1.0 mL·min-1
进样口温度:230 ℃
检测器温度:250 ℃
载气流速为1.0 mL·min-1
分流比为10
:1
进样量:1 μL
取对照品溶液,在上述色谱条件下测定。二氯甲烷理论塔板数为87819
,色谱峰与内标峰分离度大于1.5
,拖尾因子符合要求。溶液配制内标溶液的配制:取正丙醇适量,精密称定,置于50 mL量瓶中,以重蒸水稀释并定容至刻度,摇匀,得浓度为0.539mg·mL-1的内标溶液。
对照品溶液的配制:取二氯甲烷适量,精密称定,置于100mL量瓶中,以重蒸水稀释并定容至刻度,摇匀。精密量取1.25 mL,置于10 mL量瓶中,以重蒸水稀释并定容至刻度,
摇匀,得浓度为305μg·mL-1对照品溶液。
供试品溶液的配制:称取荧光素钠原料药适量,精密称定,置于10 mL量瓶中;精密量取内标溶液0.2 mL,以重蒸水稀释并定容至刻度,摇匀,得到浓度约为0.2g·mL -1的供试品溶液。
专属性考察分别取水,对照品溶液及供试品溶液,在上述色谱条件下进样分析,结果表明水及内标对二氯甲烷的测定无干扰,方法专属性良好。标准品及供试品色谱图见Fig.2~ Fig.3
。1—Dichlormethane; 2—N-propanol
Fig.2GC chromatogram of standards
2—N-propanol
Fig.3GC chromatogram of sample
检测限和定量限取对照品溶液,逐级稀释至对照品色谱峰峰高分别达到3倍和10倍信噪比。得到二氯甲烷的检测限和定量限分别为10.2 ng和30.5 ng。
线性关系考察精密量取对照品溶液1
、2
、4
、5
、7
、9 mL
分别置于10 mL
量瓶中,精密加入内标溶液0.2mL
,以重蒸水稀释并定容至刻度,摇匀,在上述色谱条件下进样分析。以对照品的质量浓度(C , μg·mL
-1)为横坐标,二氯甲烷峰面积与内标峰面积的比值(A)为纵坐标,线性回归方程为:A = 8.618 6C -0.021 6
,r =0.994 5
结果表明二氯甲烷在30.5 μg·mL
-1~ 274.5 μg·mL
-1内与峰面积呈良好线性关系。仪器精密度试验取同一对照品溶液在上述色谱条件下,重复进样5
次,计算二氯甲烷峰面积与内标比值的RSD
为2.6%
,结果表明仪器精密度良好。加样回收率试验分别精密称取荧光素钠9
份,每份约2.0 g
于10 mL
量瓶中。分别精密加入对照品溶液4
、5
、6 mL
,各加入内标溶液0.2mL
,按“溶液制备”项制备低、中、高3
个质量浓度的供试品溶液。在上述色谱条件下进样分析。测到二氯甲烷平均回收率为102.4%
,RSD
为3.4%
。样品测定取荧光素钠原料药约2 g
,精密称定,按“溶液制备”项制备供试品溶液,在上述色谱条件下进行分析,以内标法计算,二氯甲烷残留量小于10μg·mL
-1。结果见Tab.1
。Tab.1 the Determination results of dichlormethane(n = 5, 标示量 %)
No. | Dichlormethane |
1 2 3 4 5 | ND. ND. ND. ND. ND. |