方法转移杂质分离异常Case study
背景:
A实验检测某项目主峰后面无杂质,在B实验室发现主峰后面有杂质
调查:
LC-MS分析
分析:[M+H]587应该不是对应的分子离子峰,目前谱图无法找到很明显的分子离子峰。结合工艺分析:
为了进一步探究杂质是什么做了下面一系列研究:
1、 分析方法优化
调整方法梯度后,杂质出峰在8.3min,和主物质分离度符合要求。
2、 技术员合成出来此杂质,将杂质对照品用此分析方法进行了定位,此杂质正好在RT=8.3min
再次将杂质进行
LC-MS找到此杂质的分子离子峰,回到刚开始的图谱能找到[M+1]=315的分子量,对应的几个特征碎片259、215都有。587推测为杂质与目标物在质谱里面聚合产生。
结论与总结:
分析方法开发前期杂质分离度不到位会导致转移到其他实验室无法正常分离。
建议大家以后在确定成品方法时,要验证方法耐用性,特别关注与主峰分离度分离度不太好的杂质。应该换不同仪器,不同色谱柱验证一下自己的方法是否可行,如果差别较大,则说明方法不可行,要继续进行优化开发,避免出现类似的问题。