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主题：【求助】体外抑制蔗糖酶活性，求老师指导指导，感恩，

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发表于：2022/11/02 23:15:09 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
根据文献等比例缩小体积，全部的反应均在96孔板上反应，先加入10μL底物（2%蔗糖溶液），后加入各浓度梯度的样品溶液20μL，反应5min后，加入蔗糖酶溶液10μL，反应20min后，加入无水乙醇20μL灭酶，灭酶后加入20μLDNS，最后用pbs稀释测定吸光度。
（1）蔗糖酶用的是来自酵母菌的，我看文献用的都是鼠小肠里的
（2）蔗糖酶一开始用的20U/mL，DNS测定后吸光度太大，且各个样品几乎没有抑制率，今天换2U/mL，样品和阿卡波糖均几乎没有抑制率。
（3）究竟DNS测定这个是否存在问题，求老师指导。
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2024/9/26 11:49:08 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
首先呢，关于蔗糖酶的来源不同，虽然文献用的是鼠小肠里的，但来自酵母菌的蔗糖酶理论上也应该能起作用，不过可能活性等方面会有差异。
对于吸光度太大且几乎没有抑制率的问题，有可能是多个方面的原因。一方面，DNS 测定可能存在问题，比如试剂是否过期、配制是否准确、测定条件是否合适等。可以检查一下 DNS 试剂的有效期，严格按照标准方法配制试剂，确保测定的波长、温度等条件正确。另一方面，也可能是实验操作过程中的问题，比如加入试剂的顺序、反应时间的控制是否准确等。确保每一步操作都严格按照实验方案进行，时间控制要精准。
还有，不同浓度的样品和阿卡波糖都没有抑制率有点奇怪。可以考虑重新检查一下样品和阿卡波糖的浓度梯度设置是否合理，是否覆盖了可能出现抑制效果的范围。也可以检查一下蔗糖酶的活性是否正常，可以做一些对照实验来验证。
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