大家好,我用的是
液相,检测器紫外。底物PB-22用乙腈稀释,产物PB-22-3羧酸用甲醇稀释。流动相是根据文献采用A:0.1%甲酸水溶液;B:乙腈。梯度:0-1min:30%B;1-5min:50%B;5-15min:B增加至80%;15-20min:B降至30%;20min-25min:30%B。问题1:然后流动相除了跑水之外,都会出现一个杂峰并且不同的样品这个杂峰面积不一样。{尤其在210nm峰很大,230nm稍微小一点(我尝试了210/230/240/300紫外)}。然后跑了一针含甲醇乙腈的对照(浓度在2%以下和我跑的样品含量保持一致)发现存在这个峰但是峰面积不大。问题2:我将底物和产物混在一起做的标曲简称“二标”。用1mM母液稀释了三个浓度点(40-20-10μM)跑样发现峰面积不成比例,后又用同一个母液稀释两个浓度点(20-10)重复。峰面积混乱感觉没什么规律。(另一个例子底物5F-PB-22峰面积也不成比例如下图)。
求助我该怎么办呢?真的有点崩溃