主题：【分享】Hilic色谱模式的特点及保留机理

“ 在色谱分析方法开发工作中，我们经常遇到在C18上没有保留的样品，比如糖类、氨基酸、盐类等极性或离子化的分析物。通常我们会通过一些方法来增强保留，比如流动相添加离子对试剂或对分析物进行衍生化，但离子对试剂会有对色谱材料改性，对质谱等检测器造成污染等问题，而衍生化操作繁琐，也有定量准确性问题和重现性问题，而互补反相模式的亲水作用色谱-Hilic模式可能是更好的选择。”

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Hilic模式与反相模式的对比

其实当遇到C18不保留的极性分析物时，我们可以尝试另一种分离模式——Hilic模式。也叫亲水作用色谱模式，它互补于反相模式，水相洗脱能力更强，对极性（亲水性）越大的分析物吸附力越强。详见下表。                                                                                                                                                                                                                                                                                               

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HILIC保留机制

上表中提到Hilic的分离模式水的比例不少于5%，这是由其保留机制决定的，普遍认为Hilic模式流动相中的水会被吸附到极性固定相的表面形成水膜，然后分析物在水膜和流动相之间进行液液分配作用，加上极性官能团和固定相之间的氢键作用力，离子官能团之间的静电作用力等，实现被分析物的保留。水膜的作用非常重要，所以Hilic流动相中至少含有5%的水。                                                                                                                                                                                                                                                                                                                           

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案例分析

我们看一下具体实例，氰胺类衍生物极性是比较大的，比如三聚氰胺在C18柱上没有保留，而在酰胺柱上保留和分离很好，（下图9min为三聚氰胺）。                                                                                                                              上图中的三聚氰胺采用的是紫外检测器，选用200nm，末端吸收。而像糖类、氨基酸等大极性化合物往往是没有紫外吸收的，那就只能采用CAD、ELSD、RID或质谱来进行相应的检测。

下图是蔗糖和乳糖，采用氨基柱的Hilic模式，糖类紫外没有吸收，选用示差折光检测器(RID)，流动相乙腈/水=70：30能有比较好的保留和分离。                                                                                                                                    还有一点需要注意，极性分析物往往易溶于水，而我们采用Hilic模式分析时，极性样品溶于水后，要尽量用有机相去稀释，不然也会像反相模式一样产生溶剂效应，溶剂效用会随进样体积的增加愈加明显。