主题：【分享】欧盟兽药检测方法（之十七）

高效液相色谱法（HPLC）测定禽肉和禽蛋中拉沙里菌素的残留量(EEC,确证法 )


Lasalocid-Determination of Lasalocid at Residue Levels in Poultry Muscle and Poultry Eggs
（EEC，Cy 4.2 Confirming Method）

安全操作注意事项及急救

引言
拉沙里菌素是一种离子载体抗菌素。在养牛业中用作生长促进剂并作为抑制球虫剂用于养禽业。

1. 主题内容
本方法描述了禽肉样品中拉沙里菌素总量的检测方法。

2. 应用范围
该方法适用禽肉和禽蛋，当经发射光谱停留分析法确证后，用以下测定样品中拉沙里菌素的检测低限为10μg/kg。

3. 参考资料
93/256/EEC委员会决议，规定了使用激素或甲状腺抑制物的残留物的测定方法。（OJ.No.L.118,14.4.93.pp 64-74）
2022/VI/84 文件 6.11 Ⅱ-4
ISO标准78/2-1982标准制定—第二部分，化学分析标准。
MAFF,1989, Determination of Lasalocid at residue levels in poultry muscle and eggs. Food Science Laboratory, Colney Lane, Norwich. Standard Operating Procedure

4. 定义
沙拉里菌素含量是用于表示按照所描述的方法检出的禽肉和禽蛋中的沙拉里菌素的量，并以μg/kg或mg/kg表示。

5. 方法提要
该方法包括6个步骤
—组织样品在缓冲液中均质
—用有机溶剂提取
—固相二氧化硅柱提取
—HPLC紫外检测测定
—通过标准曲线内插法并考虑拉沙里菌素的回收率尤其是组织样品的回收率，来计算出拉沙里菌素的含量。

6. 仪器及试剂
6.1.1 三氯甲烷
6.1.2 四氯化碳
6.1.3 氯化钠
6.1.4 甲醇
6.1.5 无水硫酸钠
6.1.6 乙腈(色谱级）
6.1.7 正己烷
6.1.8 1,1,3,3-四甲基胍
6.2 溶液
6.2.1 饱和氯化钠溶液：氯化钠溶于水中至饱和
6.2.2 甲醇-三氯甲烷溶液：5mL甲醇用三氯甲烷配成100mL。
6.2.3 HPLC流动相：5mL 1,1,3,3-四甲基胍用乙腈稀释至1L。
6.3 标准溶液
6.3.1 沙拉里菌素标准品由提供。
6.3.2 标准储备液：精密称取约50mg沙拉里菌素溶于甲醇中并定容至250mL,储存于4℃，需当月制备。
6.3.3 中间标准液：吸取1mL标准储备液于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，储存于4℃，需当日制备。
6.3.4 工作标准液
6.3.4.1 吸取0.2mL中间标准液，用HPLC流动相稀释至10mL，最终浓度为0.4mg/mL,当日制备。
6.3.4.2 吸取1mL工作标准液（6.3.4.1），用HPLC液流动稀释至10mL，最终浓度为0.04ug/mL，当日制备。
6.4 添加程序
分别用50mL和125mL标准工作液添加至5g样品，放置15min。

7 仪器设备
7.1 离心管：100mL
7.2 分液漏斗：250mL
7.3 所有玻璃过滤器：47mL
7.4 试管：125×16mm
7.5 梨形烧瓶：25mL
7.6 圆底烧瓶：250mL
7.7 玻璃移液管：1mL和10mL
7.8 均质器
7.9 旋涡混匀器
7.10 旋转蒸发器：水浴温度50℃
7.11 2mL和0.3mL自动进样瓶
7.12 1mL一次性注射器
7.13 离心机
7.14 超声波水浴
7.15 可调移液器:200μL和1000 μL
7.16 多路氮气蒸发可加热反应装置(40℃)
7.17 膜过滤器架：13mm
7.18 膜过滤筛：13mm和47mm
7.19 滤纸15cm
7.20 固相提取装置
7.20.1 真空集合管
7.20.2 硅胶萃取柱500mg/2.8mL
7.20.3 适配器
7.20.4 萃取柱用储液槽：75mL
7.20.5 柱子在使用前用5mL正己烷淋洗
7.21 HPLC-Water 590泵
柱：10cm×4.6mm Hypercarb 7μm填充
液动相速率： 0.5mL/min
荧光检测器：Philips PU 4027，激发波长3107nm，发射波长420nm
积分仪
进样器：进样25μL
柱子和流动相：恒温于35℃