主题：【分享】欧盟兽药检测方法（之三十二）

气相色谱/质谱联用（GC/MS）确证磺胺类药物的残留(EEC,确证法 )
Sulphonamides-Confirmation of Sulphonamides by Gas Chromatography-Mass Spectrometry
（EEC，Cy 3.1 Confirming Method）
安全:
1. 有机试剂:所有的有机试剂应按危险品处理,所有步骤均应在通风橱中进行。
2. 氨:只能在通风橱中进行,并戴防护眼镜。
3. 均质:在通风橱中进行,以避免气溶胶。
4. 干冰：戴厚的防护手套和防护面具,干冰如果接触皮肤上可引起灼伤和冻疮。
5. 重氮甲烷样品准备的所有反应和使用重氮甲烷都必须在通风橱中进行，同时必须穿防护服。
不能使用带有磨口玻璃接口的仪器,这是潜在的爆炸危险品。你应确保你和其它任何人在房间中能意识到因使用重氮甲烷而存在潜在的爆炸危险。如果不是被用于直接的甲基化反应,所有产生的重氮甲烷必须立即作销毁处理。这可通过加入稀盐酸产生气泡处理。所有的玻璃器皿在离开通风橱以前必须用盐酸清洗。

救助:
1.试剂、酸和碱与皮肤接触后,用充足量的水冲洗。溅到眼睛上—用水冲洗,并且立即进行医学处理。
2.割伤—立即请求就近人员进行援助。
3.灼伤和冷冻:在冷水下冲洗受影响部位(灼伤)或用温水冲洗受影响部位(冷伤)10分钟,并请求医学处理。

1. 引言
目的 依据86/496/EEC残留指令,对饲养动物样品中的磺胺类药物进行确证。
背景 磺胺类药物是一类抗生素化合物,它们已经被用来治疗由病毒、细菌、原虫或真菌引起的疾病。如果使用超过常规治疗剂量,它们也可促进生长,因此也被加入到饲料中以增加生长速率，提高产量。
这些物质的残留可影响消费者,有些药物可引起过敏性反应,并且有一种被怀疑为致癌剂,所以CVMP规定这些物质在人们消费的食品中残留限量水平为0.1mg/kg。进行肉品中磺胺类药物残留监控以确保消费者不食用有磺胺类药物残留的肉。
依照国家残留监控计划,对屠宰场中肉组织中残留水平进行监控。自1998年1月1日起依据86/469/EEC欧盟指令进行监控，在英国监控计划中肾被选作检测样品组织。
样品最初用TLC或ELISA方法进行筛选(参考方法的标准操作步骤),用HPLC方法或GC/MS方法对阳性样品进行确证(CVL,UK)。


1. 主题内容
本方法描述了猪肾中磺胺类药物残留总量的检测方法。

2. 应用范围
本方法用于猪肾中磺胺类药物残留的分析,检出限是100μg/kg或100μg/L。

3. 参考文献
Commission Decision, 93/256/EEC, laying down the methods for detecting residues of substances having a hormonal or thyrostatic action.(OJ. No.118,14.4,93.pp 64-74)

2052/VI/84 File 6.11 II-4, Scientific Veterinary Committee, Working Group- “Reference Methods for Residues”, General Criteria for the establishment of Reference Methods for the Dtection of Residues.

ISO Standad 78/2-1982 Layout for standards – Part 2: Standard for Chemical Analysis

MAFF(1987) Working Rorty on Veterinary Residues in Animal Products Food Surveillance Paper No.22.

Takatsuki, E and Kikuchi, T.,(1990), Gas chromatorgraphic-mass spectrometric determination of six sulfonamide residues in egg and animal tissues. J.A.O.A.C. 73, 886-892

Simpson, R.M. ,Suhre, F.B. and Shafer, J.W. (1985), Quantitative gas chromatorgraphic-mass spectrometric assay of five sulfonamide residues in animal tissue. J.A.O.A.C. 68, 23-26

Matusik, J.E., Sternal, R.S., Barnes, C.J. Sohon, J.A. (1990) Confirmation of identity by gas chromatography/tandem mass spectrometry of sulfathiazole, sulfamethazine, sulfachloropyridazine, and sulfademethoxine from bovine or swine liver extracts after quantisation by gas chromatography/electron capture detection.

4. 定义
磺胺类药物含量是指按本法该法测定的肾中磺胺类药物残留的量,表示为μg/kg。

5. 方法提要
肾或肌肉的干提出物,用Bond-Elut方法净化,用重氮甲烷甲基化,甲基化的提取物用GC/MS进行分析。

6. 试剂
6.1化学试剂
6.1.1 Diazald （Aldrich Chemical Co Ltd）
6.1.2 氢氧化钾
6.1.3 乙醚
6.1.4 Ethyl digol(卡必醇)
6.1.5盐酸
6.1.6甲醇
6.1.7丙酮

6.2标准物质
固体磺胺可从公司购买,混合标准液的浓度为1mg/mL的各种相应磺胺的甲醇溶液。目前在CVL主要使用: 磺胺二甲嘧啶、磺胺甲基嘧啶、 磺胺、 磺胺吡啶 、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺胍 、磺胺氯哒嗪、磺胺二甲氧基嘧啶、磺胺喹诺啉。
标准工作溶液为0.1μg/mL,1μg/mL,10μg/mL和100μg/mL溶液,应从贮存液进行稀释制备。

7.仪器
7.1微型重氮化装置 (Aldrin Chemical Co Ltd)
7.2分液漏斗：具teflon塞,125ml
7.3离心试管
7.4水浴
7.5无氧供氮装置
7.6质谱仪:Finnigan MAT与气相色谱仪连接,并接有INCOS数据系统