主题：【讨论】加拿大输日青刀豆（芸豆）检测出草甘磷超标（19楼）

原文由 mcds 发表:
领导想让做做草甘磷的分析，没做过，听说比较难，请有经验的版友来教教是怎么做的，谢谢！

用气质来做，需要衍生，而且还有代谢物，的确比较难做。我没有开展起来。

原文由 zongguitang 发表:

原文由 mcds 发表:
领导想让做做草甘磷的分析，没做过，听说比较难，请有经验的版友来教教是怎么做的，谢谢！

用气质来做，需要衍生，而且还有代谢物，的确比较难做。我没有开展起来。

我们查到日本官方的方法用FMOC-CL衍生，用LC荧光做，可是我们是LCMS，LCMS上找不到明显的峰，所以很糊涂的。

从文档中截一段悄悄的给你
草甘膦的提取与净化
苹果：准确称取苹果样品10.0 g于250 mL聚四氟材料的离心杯中，加入去离子水50 mL，用高速均浆机均浆，振荡提取15 min后，取30 mL上清液，用50 mL二氯甲烷进行液液萃取，弃去有机相，利用旋转蒸发仪将水相浓缩至约2 mL，用水定容至3 mL，加入0.3 mL酸性调节液，待净化。称取1.4 g BIO-RAD AG50W-X8 阳离子交换树脂，装入3 mL固相萃取柱。用10 mL去离子水预淋固相萃取柱，弃去淋出液。向固相萃取柱中准确加入0.55 mL上述样品溶液，先用2.5 mL 淋洗液淋洗，弃去淋出液，再用12 mL淋洗液淋洗，收集这12 mL淋出液。淋洗液用旋转蒸发仪在75 °C条件下浓缩至1 mL左右，并且用1 mL淋洗液辅助转移至衍生化试管中，加入5 μL 浓磷酸，平衡1h，80°C氮气吹干。将衍生化试管放置于冰水浴中，然后加入1 mL三氟乙酸酐（TFAA）和0.5 mL三氟乙醇（TFE），在瓶口加上两层聚四氟乙烯材料的生料带，并用聚四氟乙烯材料的瓶盖密封。超声波辅助混合后，在100°C的油浴锅中反应1h。将衍生化后的试管置于凉水中，使其冷至室温。然后常温下氮气吹干，再用10 mL去离子水和60 mL的二氯甲烷进行液液萃取，有机相经2 cm厚的无水硫酸钠层过滤后收集于250 mL圆底烧瓶中。将水相再次用60 mL的二氯甲烷进行液液萃取，有机相经2 cm厚的无水硫酸钠层过滤后合并收集于250 mL圆底烧瓶中。40 °C条件下，旋转蒸发仪中将有机相蒸干，1 mL乙酸乙酯定容，待测。
土壤：称取土壤5g于100mL具塞三角瓶中加入2mol/l氨水30mL，震荡90min后转移至250离心杯中，5000r/m下离心10min，转移上清液至250mL圆底烧瓶中，加入30mL 2mol/l氨水重新提取土壤样品60min，5000r/m下离心10min并且合并上清液。土壤提取液在75 ℃条件下减压蒸干，利用3.5 mL水：甲醇：HCl（160：40：2.7）转移液将其转移至10 mL离心管中，5000 r/m下离心10 min，转移上清液至衍生化试管中，加入20μL浓磷酸，平衡1h，80 ℃条件下氮气吹干。
加入1mL三氟乙酸酐（TFAA）和0.5mL三氟乙醇（TFE），100 ℃油浴锅中反应1h，冰水冷却至室温，氮气吹干。10mL水和60×2mL二氯甲烷对衍生化产物进行液液分配，经无水硫酸钠层过滤后将有机相40 ℃减压蒸干，乙酸乙酯定容至2mL，供气相分析。
吡草醚的提取与净化
苹果： 苹果30g切碎后加入95ml乙腈超声提取30min转入250ml聚四氟离心杯中，少量冲洗后提取液体积为100ml。离心杯中加入15g无水硫酸镁和5g氯化钠。混合物剧烈搅拌5min，3000r/min离心15min。取上清液80ml转移到250ml的圆底烧瓶中，40℃减压蒸干，乙腈定容3ml。取2ml加入预先用2ml乙腈淋洗的PSA固相萃取小柱中，然后加入3ml乙腈进行淋洗，收集所有淋出液于小尾巴瓶中，氮气吹干，乙腈定容1ml，待HPLC分析。
土壤：称取土壤30g（过2mm筛）于100ml具塞三角瓶中加入丙酮：水（80：20，v/v）50ml，放入超声波振荡器中超声提取20min，抽滤；滤渣加入50ml丙酮超声提取10min，合并两次滤液。提取液直接用旋转蒸发仪蒸至10ml左右，过无水硫酸镁层脱水后减压浓缩，氮气吹干。提取液用乙腈：水（30:70，V/V）定容至3ml，5000r/min离心5分钟后用C18固相萃取柱净化。C18小柱置于12孔固相萃取装置上分别用乙腈和水5ml预淋活化，加入上述提取液2ml使其以1-2滴/秒的速率通过C18小柱，用3ml乙腈：水（50:50，v/v）淋洗小柱后通空气使柱干燥，最后用3ml乙腈进行洗脱，洗脱液用氮气吹干后用乙腈定容1ml，待HPLC分析。
4.2 分析测定
4.2.1 仪器条件
气相色谱条件：VARIAN gc 3800气相色谱仪，带有氮磷检测器，毛细管柱 （supelco equity-5, 30m×0.25mm ID，膜厚0.25um）及色谱工作站。
进样口温度160 ℃；检测器（NPD）300 ℃；载气为氮气，流速0.3 mL/min。程序升温（初始100 ℃保留1 min，20 ℃/min升至130 ℃，再1 ℃/min升至133 ℃保留10.5 min，最后20 ℃/min 升至150 ℃保留2 min）。
气相色谱质谱联用仪的条件：Agilent5795质谱仪，带有Agilent Hp-5毛细管柱（30m×0.25mm ID，膜厚0.25um），检测条件同气相色谱条件，但流速为1 mL/min。
高效液相色谱条件：色谱柱：GL Sciences Inc(250mm×4.6mm,5μm) C18柱；流速：1ml/min；流动相：乙腈：水＝65:35（V/V）；紫外检测波长：207nm；进样量：20μL。
高效液相色谱质谱联用仪的条件：大气压化学电离离子化源（APCI），正离子检测方式（ESI+）。干燥气温度：250℃；APCI源温度：325℃；干燥气（N2）流速5 L/min；喷雾器压力60 p.s.i.（1 p.s.i.＝6894.76 Pa），M/Z范围50-400 amu。

以下是日本厚生劳动省食品中残留农药兽药饲料添加剂检测方法：
草甘瞵检测方法
1．分析目标化合物
草甘瞵、草甘瞵铵盐、草甘瞵异丙醇胺盐、草硫磷、草甘瞵钠盐
2．仪器设备
带荧光检测器的高效液相色谱仪。
3．试剂
使用附录2所列试剂。
4．标准品
草甘瞵：含草甘瞵99％以上，分解点为230℃。
5．试验溶液的制备
a 提取方法
① 谷类、豆类、水果、蔬菜、种子类和末茶
谷类和豆类：将样品粉碎通过420μm的标准网筛后，称取其20.0g。
水果、蔬菜和种子类：准确称取约1kg样品，必要时定量加入适量水，搅碎混合均匀后，称取相当于20.0g样品的量。
末茶：称取20.0g样品。
加入100mL水和50mL三氯甲烷，用振荡器激烈振荡30分钟后，以毎分钟3000转离心分离，分取水层。沉淀中加入50mL水，充分振荡后，按上述同样条件离心分离，合并水层。过滤后，加水准确至200mL。移取其25mL于磨口减压浓缩器中，在50℃以下除去水。残留物中加2mL水溶解。
②末茶以外的茶
将10.0g样品浸泡在500mL100℃水中，室温下放置5分钟后，过滤，移取20mL冷却后的滤液于磨口减压浓缩器中，在50℃以下除去水。残留物中加入2mL水溶解。
b 净化方法
在内径10mm，长300mm色谱管中，注入12mL悬浮在水中的强酸性阳离子交换树脂（粒径37～74μm），放出水至柱上端留有少量的水。柱中注入50mL水，舍弃流出液。注入a 提取方法所得的溶液后，用1mL水洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，洗涤液注入柱中，舍弃流出液。柱中再注入8mL水，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在50℃以下除去水。残留物中加5mL 0.05mol／L四硼酸钠溶解。再加入5mL 0.1％氯甲酸-9-芴甲酯丙酮溶液，塞紧，充分振荡后，放置20分钟。此溶液中加入10mL乙酸乙酯，振荡1分钟后，静置,收集水层，此为试验溶液。
6．操作方法
a 定性试验
按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品按5．试验溶液的制备中b 净化方法同样操作所得的结果一致。
操作条件
柱填充剂：强碱性阴离子交换树脂（粒径10μm），
柱：内径4.5mm，长250mm的不锈钢管
柱温：40℃
检测器： 激发波长254nm，发射波长315nm
流动相： 乙腈：0.1mol／L磷酸二氢钾溶液（1：3）的混合溶液。调节流速使草甘瞵在11～15分钟流出。
b 定量试验
根据与a 定性试验相同的操作条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量。
7．定量限
0.01 mg/kg
8．注意事项
草甘瞵的分析值中包括草甘瞵、草甘瞵铵盐、草甘瞵异丙醇胺盐、草硫磷和草甘瞵钠盐。

草甘膦、氨甲基膦酸的 HPLC 测定方法

我们最近也在开发这个项目，这个项目确实有点难度

用flow-injection 先试一下MS-negative. 检测限可能会比其它农药高一些.

原文由 雾非雾(mcds) 发表:

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领导想让做做草甘磷的分析，没做过，听说比较难，请有经验的版友来教教是怎么做的，谢谢！

用气质来做，需要衍生，而且还有代谢物，的确比较难做。我没有开展起来。

我们查到日本官方的方法用FMOC-CL衍生，用LC荧光做，可是我们是LCMS，LCMS上找不到明显的峰，所以很糊涂的。

第三方检测机构可以测

用国标gcms检测的，效果还不错，但做起来挺烦。说是有吸附。

草甘磷的亚硝基化单扫描示波极谱法测定及其应用