主题:【在线讲座33期】液相色谱柱使用疑难问题解析(答疑结束)

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plexu
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原文由 老多_小多(emoc98311) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教,也算是讨论吧:

目前的色谱柱,就跟色谱仪器一样,国内的东西还是赶不上国外的,不管是从填料的开发上还是色谱柱技术上,我觉得都还有一定的距离。厂家所宣传的技术有很多,让我们使用者也是看的眼花缭乱,真正要选择自己喜欢的柱子,还得不断试验,或者是选择品牌。填一根柱子,就好像做包子,用不同的馅、不同的搓面方法,味道都相差很大,开发方法中一但选中了一个品牌的柱子我们也很少去更好。
问题:
1.色谱柱的技术都有哪些?比如封尾等,这些技术在应用时都体现在哪里?
2.色谱柱技术的差距在哪里?


问题有点大,也不能一下子回答得很全面,而且现在的一些公司,已经很难分清是国内还是国外公司,这方面的问题我们多探讨吧。

色谱柱技术包括填料技术和装柱技术,填料技术自不待言,填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。装柱技术也没有想象中的这么简单,不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度,装柱工艺都有所不同,要装出紧密、稳定、均一的柱床,更多是一门艺术,需要经验积累。

国内和国外想比,我认为色谱柱的差距在于:国内公司以前都不会自己开发填料,一般买国外现成填料装柱,买到的填料质量控制权不在自己手里。另外因为装柱历史短,经验积累少,装柱工艺也没有完全达到国外水平。

另外,对色谱柱性能很关键的基础材料-----裸硅胶,国产的还不过关,在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比,差距很大。
xue2009
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4)流动相中加入适量的四氢呋喃
    往流动相中加入少量的四氢呋喃有时可以改善峰形、增大分离度,很多色谱工作者都知道和使用,但其机理似乎少人提及。通常所加入的量在5%以内即可,需要的时候可以加入更大的量。

请问LZ,这个机理是什么呢?我有和别人交流过:向流动相中加异丙醇,四氢呋喃可以提高流动相的溶解度,改善峰型等等,原因我现在只是知道这些物质的洗脱能了更强。
小卢
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plexu您好!我有以下问题想请教:
第二个问题:
关于色谱柱的填装问题!
我个人认为现在色谱柱的填装一般有3种情况:
1.国外生产填料并填装完成成品卖到国内
2.国外生产填料,国内填装销售
3.国内生产填料,国内填装销售
一般情况下,第1种情况卖的最贵,也质量最好!可是我就不明白了:
如果是填料的生产很复杂的话,那么填装上国内也跟不上去吗?为什么换在国内填装就会出现或多或少的一些小问题呢?
再就是国内的色谱柱在市场上占有比例如何啊?
小卢
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原文由 plexu(plexu) 发表:
原文由 小卢(luxw) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教:
柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢?
原来也讨论过这个问题,我也拆下来清洗过,但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了,但使用寿命会不会减少呢?


一般不建议把筛板拆下来清洗,也不建议挖补已污染的柱头填料,因为这样会影响柱床的稳定性,修补后的色谱柱的性能并没有很好的保障。用强溶剂反冲清洗色谱柱是色谱柱污染后可以采取的措施,不过不要等污染已经很严重才想起这样做,定期用甲醇进行清洗维护更好些。反冲清洗再生的方法用了不奏效,一般也可以把色谱柱报废了,实在舍不得,拆筛板挖填料也算是最后的手段。


原来以为拆洗是首先的选择,原来这是最后的选择啊!
其实有时候还是懒,总感觉反向冲洗浪费时间且效果不一定好!
从我拆洗筛板的情况来看,其实也不理想,因为每次拆洗了也就坚持这一次,也许下次试验又出问题了!
plexu
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原文由 yantiewei(yantiewei) 发表:
很好,很实用。
我有个问题:如果柱子取下来放置一段时间,需要做什么保护吗?


讲座帖子里已提到柱子如何长期存放的内容。对一般的反相柱,也就是洗干净后放到纯甲醇(乙腈)或者是80%左右的甲醇(乙腈)水中,然后用堵头塞紧柱两头,以免保存溶剂挥发,应该不需要做特殊的保护。
小卢
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原文由 qingqingcao(qingqingcao) 发表:
原文由 小卢(luxw) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教:
柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢?
原来也讨论过这个问题,我也拆下来清洗过,但我看到柱前段的污染更甚,于是就用刀片刮了刮,然后把清洗好的筛板安装上去。问题解决了,但使用寿命会不会减少呢?


我的看法是:柱头污染了,就取出污染的,再装一些填料。因为加入你刮了些填料,那么微观的塔板数就少了。假入你刮得不多,仅表面,可能就是一些脏物,所以,问题解决。但是今后还会有同样问题,再挂,那么不小心刮,影响柱效。建议还是装一个预柱。


有道理!我的实际经验就是问题当时解决,下次还会再有!因此这不是长久之计啊!还是反向冲洗吧!
安装预柱我也考虑过,但总感觉会影响样品分析。这个问题还是问下专家吧,我单独发帖问!
小卢
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plexu您好!我有以下问题想请教:
第三个问题:
预柱或保护柱用还是不用的问题!
原来分析中药品种时,我一直都是用保护柱。但来到新公司后,发现大家都没有使用,几个实验室连保护柱都没找到一个,也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工,说是有可能影响药品分析。
我就想问:安装保护柱后会影响样品分析吗?我们做的大多是头孢类的抗生素。
plexu
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原文由 xue2009(xue2009) 发表:
原文由 linzhushan(linzhushan) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教:
色谱柱技术的差距在哪里

我觉得还是个封尾技术的问题,有些公司承诺的完全封尾,实质上是不可能的


完全达到100%封尾,确实不可能,国外的公司也做不到。一般能达到50%硅羟基和短碳链封尾试剂反应就不错了,因为短碳链烷烃毕竟还是比原来硅羟基上的H大多了,还是会有空间位阻效应。

但色谱柱技术的差距不在封尾。国内公司如果能做填料键合,封尾水平和国外大公司相差不大。
plexu
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原文由 小卢(luxw) 发表:
plexu您好!我有以下问题想请教:
第三个问题:
预柱或保护柱用还是不用的问题!
原来分析中药品种时,我一直都是用保护柱。但来到新公司后,发现大家都没有使用,几个实验室连保护柱都没找到一个,也就是说大家从来都没有用过。后来问一个老员工,说是有可能影响药品分析。
我就想问:安装保护柱后会影响样品分析吗?我们做的大多是头孢类的抗生素。


如果用一个质量好的又和分析柱匹配保护柱,应该不会影响分析。匹配指的选用柱芯填料和分析柱填料在粒径和固定相类型上一致,质量好,首先要求柱芯装填质量一定要好,不能因为是柱芯,就随便把填料用干法往里面一放就完事了;另外柱芯卡套接入系统的产生的死体积要小。
一个质量好的保护柱,有时还能增加分离柱效。
牛牛
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plexu您好!我有以下问题想请教
"内径的影响同样很大,根据线流速相同柱压相同的原则,4.6mm内径的色谱柱流速为1ml/min,约相当于在2.1mm内径色谱柱上的0.2ml/min流速,在10mm半制备色谱柱上的5ml/min,计算公式为v=1.0ml/min x(内径r/4.6)2。所以在换不同内径色谱柱时,请及时调整流速,以免因高柱压损伤色谱系统。"
能不能说具体点,我怎么算不对啊?
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