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主题：【第三届原创参赛】混有色素的脂溶性成分的分离

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chuanxinlian
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发表于：2010/09/28 20:55:12 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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维权声明：本文为chuanxinlian原创作品，本作者与仪器信息网是该作品合法使用者，该作品暂不对外授权转载。其他任何网站、组织、单位或个人等将该作品在本站以外的任何媒体任何形式出现均属侵权违法行为，我们将追究法律责任。

混有色素的脂溶性成分的分离



背景介绍
    对于做天然药物分离的同仁们都知道，很多时候我们用溶剂提取完之后的浸膏经常是有颜色的，就是说我们的目标化合物或者说对我们有用的东西与杂质色素混在一起，色素有脂溶性的，也有水溶性的，有时候色素与其他的化合物很难分离，下面就我个人求学期间的一点小小的经验来跟大家分享一下，仅供参考，说的不对的地方还请大家多指正。

    硕士期间做的课题为某植物环己烷萃取部分的分离。因为之前就有师姐做过该植物，提取工作我就省了，当时直接拿到手的就是该植物乙醇提取物的环己烷萃取后的浸膏，看到黑糊糊的浸膏（其实是绿的都发黑了），心里也没有太多感受，因为那时候才刚上完研一，对化合物分离也不是很了解，没什么概念，不知道眼前的东西是好做还是难做，只是听其他人说：这怎么分啊，这么多色素。由于本实验室课题有限，课题的质量也有待于改善，我也只有做这个题的命了，怎么着都不可能换题了，于是接下来就开始了我与色素斗争的实验生涯。

把我分离化合物的过程与方法与大家分享一下：

    1．首先把所有的浸膏过一遍大的硅胶柱色谱，按极性大小把化合物大致的粗略地分一下段，最后分成7-10个流分，其实每一个流分中都是混有色素的，只是色素在里面占得比例不同罢了，因为色素也有极性大的和极性小的，而且色素在硅胶柱上还很容易拖尾，从平时展的硅胶薄层板上就能看出来，一展有时候就成一条绿绿的长带。但是即使这样，过一遍硅胶柱还是有用的。

    2. 上面的硅胶柱下来的流分如果量比较大（比如几十克）的话，我就会选择换一个溶剂系统，再过一遍小点的硅胶柱，因为脂溶性的流分可以选择的填料毕竟太少了，只能在硅胶上下功夫了，然后再分成几个量小的流分，同样，色素依然留在各个流分中。

    3. 第一次过硅胶柱洗脱下来的量小的流分可以用过Sephdex LH-20柱（就是平时所说的羟丙基葡聚糖凝胶，其分离原理是根据分子量的大小，将分子量不同的化合物分离开来），这种填料对色素和其他化合物的分离效果很好，因为一般的色素（比如叶绿素），分子量都很大，与一般的化合物的分子量差别都较大，利用这种方法很容易将他们分开，还有就是过Sephdex LH-20柱上样量一定不要太大，否则效果很不好，甚至有时候会没有效果；柱子的流速也要控制，不能太快，否则也会达不到预期的效果。

    4. 过完凝胶的流分基本上就没有色素了，然后就可以按正常的分离方法分离了。在硅胶薄层板上分离效果好，且成分比较简单的流分可以采用制备薄层的方法分离，不仅效果好，而且速度很快，我们对分离的化合物的量要求不是很多，mg级就行了，够测NMR，然后能剩点测活性的就差不多了，所以制备薄层是一种很好的分离方法，快速，有效，还经济。

    5. 极性稍大的，且在硅胶薄层板上的分离效果不佳的，还可以用制备液相，其实脂溶性的成分有的还是可以用反相HPLC的，只不过有机溶剂的比例稍大而已。

    6. 还有的样品如果成分比较复杂的话，还可以再试试过一遍Sephdex LH-20，不过这时候就应该选稍长一点的柱子，这样效果可能更好。

    7. 化合物就一个个地出来了，然后去测NMR，解谱，。。。。。。最后就等着毕业了。


附：还有一个可能有效的除色素的方法，跟大家分享一下：

    将药材的乙醇提取液（大于50%乙醇提取液均可）直接通过一个装有D152树脂柱（此树脂也以同浓度的乙醇湿法装柱，并以同浓度乙醇洗至流液无浑浊现象，树脂量与药材比例一般为1：3左右），收取流液即可。此方法快速，此树脂对叶绿素有超强的吸附能力容量极大，而在大于50%乙醇的溶剂环境中，对其它成分吸附较少。


我的愿望： MP3一部，音乐无处不在，谢谢。
最后祝大家上学的学业有成，上班的工作顺利！
附件：
混有色素的脂溶性成分的分离.doc
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kaikaifeng
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2010/9/28 21:06:53 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
介绍得很详细很全面~
对于脂溶性成分的分离，一直是个难点~
楼主如此多的经验与心得，对大家来说是一笔宝贵的财富~

希望楼主能常来~
并希望能多发原创~
比如关于除色素的方法与心得~
还有解谱方面的，等等~

最后，预祝成功~
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liuliuhui
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2010/9/28 21:59:53 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
对啊，楼主跟色素斗争的勇气可嘉啊！
利用凝胶除色素是个好办法，利用了色素分子量比其他物质大的特点。
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幽灵龙猫
xiaodu2007693
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2010/9/28 22:03:59 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
看你的名字以前应该做过穿心莲，呵呵
欢迎常来交流~
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liuliuhui
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2010/9/28 22:42:12 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
还想问下楼主，对经凝胶除掉的色素怎么处置了
是扔掉了，还是~~~~~~~~~~~~~？
我以前做过色素的分离，不过是一个变两个，两个变四个~~~~~~~~~~~
如果楼主也分过的话，很愿意交流
该帖子作者被版主 xiaodu2007693加 2积分， 2经验，加分理由：欢迎交流
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chuanxinlian
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2010/9/29 8:30:46 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 liuliuhui(liuliuhui) 发表:
还想问下楼主，对经凝胶除掉的色素怎么处置了
是扔掉了，还是~~~~~~~~~~~~~？
我以前做过色素的分离，不过是一个变两个，两个变四个~~~~~~~~~~~
如果楼主也分过的话，很愿意交流

谈到色素就想到了我曾经的痛苦岁月，再也不想再见到那些绿的发黑的东西了，跟你一样，楼主我也分过色素，不过分色素实在不是个靠谱的想法，你们老板怎么跟我们老板有着如此相似的想法呢？！很多色素的性质不稳定，光、热和PH都能影响它的结构，很容易发生结构变化，在你还不知情的时候，它就偷偷的像细胞分裂似的，一个变俩，俩变四个。。。。。。其实色素有很多研究方式，但是像分离其它化合物的方式来分离它，然后再结构鉴定，不仅难，关键是没有任何意义。敢问您做色素有什么结果吗？哈哈
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2010/9/29 9:37:53 Last edit by chuanxinlian
chuanxinlian
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2010/9/29 8:33:52 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 幽灵龙猫(xiaodu2007693) 发表:
看你的名字以前应该做过穿心莲，呵呵
欢迎常来交流~

想必这位同学也是做中药的吧，难道你实验室也有做穿心莲的？太巧了，有机会可以共同探讨一下哦。
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kaikaifeng
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2010/9/29 9:45:20 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 chuanxinlian(chuanxinlian) 发表:
原文由 幽灵龙猫(xiaodu2007693) 发表:
看你的名字以前应该做过穿心莲，呵呵
欢迎常来交流~

想必这位同学也是做中药的吧，难道你实验室也有做穿心莲的？太巧了，有机会可以共同探讨一下哦。


你的许愿，要MP3，是不是把型号什么的，都写得详细一点~
MP3，可是有很多不同款式不同价位的呀，对吧~
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baowzh
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2010/9/29 9:47:25 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
你的D152树脂是在哪买的啊？可不可以介绍一下脱色用的吸附剂啊？
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xiaohui9804
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2010/9/29 12:01:05 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
楼主在分离色素成分较多的脂溶性部位真是有心得啊，如果早些认识你就好了，我之前处理色素是先用石油醚萃取，接下来用氯仿萃取，我就做得氯仿萃取部位，它还是像石油醚部分那么黑，我就直接进行大硅胶柱的粗分段，分到感兴趣的部分就专攻它，感觉当时做得很不顺，看到嘿嘿的就头疼，工作进展缓慢就不用说了，后来还是尝试了Sephadex LH-20 用乙酸乙酯装柱走柱子 感觉效果不错，分离某些成分表现为 色素成分不保留而吸附目标物。

Sephadex LH-20 乙酸乙酯系统的柱床体积小，填料更紧密，对色素除外的脂溶性或中等极性成分有较好的分离效果。
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2010/9/29 12:04:51 Last edit by xiaohui9804
learner1999
learner1999
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2010/9/29 16:48:57 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
D152树脂需要在大于50%乙醇提取液?
请问楼主是指提取剂需要时混合溶剂或者纯的乙醇么？
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