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主题：【求助】MODLI-TOF MS测分子量

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qzhaiyan

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发表于：2011/06/22 21:16:46 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

悬赏金额：10积分状态：未解决

最近做MODLI-TOF MS测分子量，我的目的蛋白分子量是7.4KD，可是打出来的图谱没有符合的，小了将近2KD。克隆的蛋白基因测过序，应该没有问题。有没有可能是质谱不对，还是其它地方有问题。求帮助！

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该帖子作者被版主 lucia_J加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励提问！

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2011/6/23 21:25:34 沙发管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我个人觉得仪器的问题的可能性比较小
应该是在分离提纯中出了问题，你要的东西可能没提纯出来

该帖子作者被版主 hgy154加 2积分， 2经验，加分理由：鼓励发帖!

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goldendays

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2011/6/24 9:24:45 板凳管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

你用标准品做过对照没？MALDI TOF要记得及时校验的。校验不及时，得到的结果会很意外的

该帖子作者被版主 hgy154加 2积分， 2经验，加分理由：谢应助！

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hwd6218554

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2011/8/15 12:50:22 马扎管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

即使没有标准品校准，在1万以下的范围，MALDI也不会有2000Da的差距的，你看看在样品获得过程中是否出问题，你先可通过别的方法验证是否获得你表达蛋白，再做分子量测试。

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liufeilzu

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2011/8/22 9:30:59 地毯管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

跑个page胶，不过2kda 的分子量差别有点小，调整TOF的激光能量试试

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daoyuanli

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2011/9/2 23:59:38 地板管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

应该是样品的原因吧。
你的蛋白有没经过纯化？
怎么会有这么多杂峰啊
MALDI-TOF的峰一般是带一个单位的电荷，但有时也会有带两个单位电荷的，这样7.4k，有可能在3700左右会有峰。
下面这个图是我以前做过的BSA的MALDI-TOF检测图谱，几个峰都是BSA的，只不过是因为带的电荷不同罢了。

不过这个MALDI-TOF的分辨率也太差了吧？
什么公司？什么型号的？

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2011/9/3 0:11:06 Last edit by daoyuanli

daoyuanli

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2011/9/3 0:16:16 6楼管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

我们用得ABI的4800
在8000Da以下，误差在20ppm以内，有时仪器状态好的话可以做到10ppm以内，也就是说如果目标分子的分子量为8000Da，其误差应该是在0.08Da以内。
而在20000-200000Da，误差一般在100Da以内，有时也会达到200Da，不过这个时候仪器给的分子量其实是一个平均分子量，这个时候仪器的分辨率下降，同位素峰分不开，就像上面的BSA，给的分子量是66442.9375Da，其实只是一个平均分子量，并不是一个精确的分子量。

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