主题：【第六届原创】气相色谱法测定酮咯酸氨丁三醇中的乙醇和1,2-二氯乙烷

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发表于：2012/12/30 15:11:49 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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因工作需要，需要对酮咯酸氨丁三醇中的残留有机溶剂乙醇和1,2-二氯乙烷进行方法学研究，乙醇为三类溶剂，药典规定限度为0.5%，1,2-二氯乙烷为一类溶剂，药典规定限度为0.0005%，因为1,2-二氯乙烷的限度较低，在FID检测器下很难检测，故需要用到ECD检测器检测1,2-二氯乙烷。

方法学研究为，方法一，乙醇的检测；方法二，1,2-二氯乙烷的检测。

1.1方法概述

应用GC外标法对酮咯酸氨丁三醇中的残留有机溶剂乙醇进行定量分析。载气：氮气；检测器：FID。

1.2对照品及样品

名称	来源	批号
酮咯酸氨丁三醇样品	某医药企业	120201
乙醇	西陇化工股份有限公司	1107011

1.3仪器和仪器参数

气相色谱仪型号：岛津公司GC-2010

天平型号：梅特勒公司XS105顶空进样器型号：DANI公司 HSS86.50

色谱柱类型：DB-624 规格30m×0.53mm×3.0µm

载气：氮气

柱温：50 ℃

检测器：FID检测器温度: 250℃；进样口温度: 200℃；

流速： 3.0 ml/min；进样量： 1.0ml；分流比： 10：1

样品盘平衡温度： 80℃；定量环温度： 90℃；

传输线温度： 100℃；样品盘平衡时间： 30min

1.4溶液配制

对照溶液：准确称取乙醇50mg于100ml容量瓶中，用水稀释定容至刻度，摇匀，精密移取3ml置于20ml顶空瓶中，密封即得对照溶液。

准确称取样品0.3g，置于20ml顶空瓶中，加水3.0ml，密封即得供试品溶液。

1.5验证内容及结果

1.5.1系统适用性试验

方法：

取酮咯酸氨丁三醇溶残对照溶液，依法连续进样5次，记录乙醇峰面积的相对标准偏差（RSD%）。

乙醇峰面积的相对标准偏差RSD应不大于10%，乙醇的理论塔板应不小于10000，乙醇的拖尾因子应不大于1.5。

结果：

序号	1	2	3	4	5	RSD%
A乙醇	905389.6	869116.9	831750.9	847218.0	904148.3	3.9%
理论塔板	30789.6	30620.2	30097.7	30618.3	30803.9	-------
拖尾因子	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	-------

1.5.2专属性及峰定位试验

方法：

A、空白溶剂色谱图精密量取3ml水置于顶空瓶中，密封，依法进样，得空白溶剂色谱图。

B、乙醇峰定位称取适量乙醇置于20ml顶空瓶中，加水3.0ml，密封，依法进样，得乙醇峰定位色谱图。

C、样品溶液准确称取0.3g样品，置于20ml顶空瓶中，加水3.0ml，密封，依法进样，得样品溶液色谱图。

D、专属性溶液精密称取0.3g样品,置于20ml顶空瓶中，加对照溶液3ml，密封，得专属性溶液。依法进样，得专属性溶液色谱图。

结果：

名称	保留时间（min）	理论塔板	拖尾因子
乙醇	4.238	30667.3	1.2

1.5.3线性试验

方法：

对照贮备溶液：准确称取乙醇100mg（实际称重 100.6 mg）于100ml容量瓶中，用水稀释定容至刻度，摇匀即得对照储备溶液。

依次精密量取对照储备溶液6.0ml（120%）、5.0ml（100%）、4.0ml（80%）、2.5ml（50%）、1.0ml（20%）、0.5ml（10%），分别置于10ml容量瓶中，用水稀释定容至刻度，摇匀，各取3.0ml置20ml顶空瓶中，密封，作为线性试验溶液，依法测定，记录峰面积，以乙醇峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，进行线性回归，得回归方程。

乙醇线性回归方程的相关系数应＞0.99。

结果：

1.5.4溶液稳定性试验

方法：

依法配制酮咯酸氨丁三醇溶残对照溶液，并于配制后0h、1h、2h、4h、6h、8h依法进样分析，记录乙醇峰面积，计算乙醇峰面积的RSD（%）。

乙醇峰面积的RSD≤10%。

结果：

进样时间	0	1h	2h	4h	6h	8h	RSD%
A乙醇	1060939.2	1112721.2	934277.7	983376.1	982098.1	1127851.2	7.7%

1.5.5定量限与检测限

方法：

精密量取线性贮备溶液适量，加水稀释成一系列不同浓度的溶液，摇匀后进样分析，当组分的信噪比S/N=10±1时，即为其定量限；当组分的信噪比S/N=3±1时，即为其检测限。

结果：

定量限		检测限
杂质名称	乙醇	杂质名称	乙醇
S/N	10	S/N	4
浓度（ppm）	3.3	浓度（ppm）	1.1
噪音	25微伏

1.5.6精密度

1.5.6.1重复性试验

方法：

精密称取酮咯酸氨丁三醇6份，每份0.3g，分别置于20ml顶空瓶中，加水3ml,密封，得6份供试品溶液。依法配制酮咯酸氨丁三醇溶残对照溶液一份，按测定方法分析，记录各峰面积，计算各样品中残留溶剂的含量。

样品中乙醇含量的RSD≤10%。

结果：

样品序号	1	2	3	4	5	6	RSD%
样品质量（mg）	301.2	303.1	299.5	300.2	298.5	301.6	-----
乙醇（%）	0.034	0.035	0.033	0.031	0.031	0.034	4.5%

1.5.6.2中间精密度试验

方法：

依法配制酮咯酸氨丁三醇溶残对照溶液。分析人员A于第一天精密称取样品6份，每份0.3g，分别置于20ml顶空瓶中，加水3ml，密封，得6份供试品溶液；第二天分析人员A和B按相同方法再各配制6份供试品溶液，按测定方法进样分析，记录峰面积，计算乙醇的含量，计算不同分析人员同一天测定结果和同一人员不同天的测定结果（n=18）的RSD（%）。

不同分析人员同一天测定结果和同一人员不同天的测定结果的RSD≤15%。

结果：

供试品溶液		样品质量(mg)	对照溶液浓度(mg/ml)	乙醇%
第一天A	1	301.2	0.521	0.034
	2	303.1	0.521	0.035
	3	299.5	0.521	0.033
	4	300.2	0.521	0.031
	5	298.5	0.521	0.031
	6	301.6	0.521	0.034
第二天A	1	300.5	0.491	0.036
	2	299.1	0.491	0.038
	3	298.3	0.491	0.037
	4	298.9	0.491	0.036
	5	300.6	0.491	0.038
	6	301.7	0.491	0.037
第二天B	1	298.5	0.493	0.036
	2	298.7	0.493	0.033
	3	299.4	0.493	0.036
	4	301.2	0.493	0.038
	5	300.5	0.493	0.036
	6	299.6	0.493	0.037
RSD%		---	----	6.1%

1.5.7回收率试验

方法：

精密称取已知溶残含量的酮咯酸氨丁三醇样品0.3g，共9份，分置于20ml顶空瓶中，分别精密加入10.0%对照溶液3.0ml、50.0%对照溶液3.0ml、100.0%对照溶液3.0ml，各3份，密封，即得回收率试验供试品溶液。然后配制对照溶液一份，依法进样分析，计算回收率。

要求乙醇在3个浓度（10%、50%、100%）的回收率均在80%～120%范围内。

结果：

	相对浓度	序号	样品质量（mg）	已知量（mg）	加入量（mg）	测得量（mg）	回收率%	平均回收率%
乙醇	10.0%	1	300.6	0.1052	0.1515	0.2622	103.60	103.9
		2	302.1	0.1057	0.1515	0.2676	106.86
		3	299.8	0.1049	0.1515	0.2584	101.28
	50%	1	300.2	0.1051	0.7575	0.8254	95.09	99.4
		2	302.6	0.1059	0.7575	0.8434	97.36
		3	304.6	0.1066	0.7575	0.9076	105.75
	100%	1	310.2	0.1086	1.515	1.8063	112.06	106.5
		2	300.4	0.1051	1.515	1.6832	104.16
		3	299.7	0.1049	1.515	1.6684	103.20

1.5.8耐用性试验

方法：

依法配制对照溶液4份，按如下方法改变色谱条件，进样分析，乙醇的理论塔板不得低于10000，拖尾因子不得大于1.5。

色谱条件改变项目	改变后条件
柱温	48℃
柱温	52℃
流速	2.5ml/min
流速	3.5ml/min

要求乙醇的理论塔板不得低于10000，拖尾因子不得大于1.5。

结果：

名称	乙醇理论塔板	乙醇拖尾因子
柱温48℃	30538.5	1.2
柱温52℃	30917.7	1.2
流速2.5ml/min	34494.1	1.2
流速3.5ml/min	27301.8	1.2

1.6实际样品检测

方法：

依质量标准草案，配制一份对照溶液，3批供试品溶液，依法进样分析，按外标法计算3批样品中乙醇的含量。

样品中乙醇含量不得超过0.5%。

结果：

批号	样品质量（mg）	对照溶液浓度（mg/ml）	乙醇含量（%）
120201	300.8	0.495	0.04%
120202	301.2	0.495	0.04%
120203	299.7	0.495	0.1%

2.1方法概述

应用GC外标法对酮咯酸氨丁三醇中的1，2-二氯乙烷进行定量分析。载气：氮气；检测器：ECD。

2.2对照品及样品

名称	来源	批号
酮咯酸氨丁三醇样品	某医药企业	120201
1，2-二氯乙烷	上海凌峰化学试剂有限公司	20100831

2.3仪器和仪器参数

气相色谱仪型号：岛津公司GC-2010

天平型号：梅特勒公司XS105

色谱柱型号：HP-1 规格：30m*0.53mm*5.0μm

载气类型：氮气

柱温：60℃

检测器类型：ECD 检测器温度：250℃

进样口温度200℃ 柱流速6ml/min进样量2μL

2.4溶液配制

对照溶液：准确称取1，2-二氯乙烷10mg于100ml容量瓶中，用水稀释定容至刻度，摇匀，从中精密移取1.00ml，置于另一100ml容量瓶中，用水稀释定容至刻度，摇匀，即得对照溶液。

供试品溶液：准确称取样品1.0g，置于5ml容量瓶中，用水稀释定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.5验证内容及结果

2.5.1系统适用性试验

方法

取酮咯酸氨丁三醇1，2-二氯乙烷对照溶液，依法连续进样5次，记录1，2-二氯乙烷峰面积的相对标准偏差（RSD%）。

1，2-二氯乙烷峰面积的相对标准偏差RSD应不得大于5%，1，2-二氯乙烷的理论塔板不得低于5000，1，2-二氯乙烷的拖尾因子不得大于1.5.

结果

序号	1	2	3	4	5	RSD%
A二氯乙烷	80906.4	77849.9	83086.7	82828.3	83410.7	2.8%
理论塔板	7480.8	7422.3	7099.3	8135.6	7262.2	----
拖尾因子	1.1	1.1	1.1	1.0	1.1	----

2.5.2专属性及峰定位试验

方法

A、空白溶剂色谱图取纯化水，依法进样，得空白溶剂色谱图。

B、1，2-二氯乙烷峰定位称取适量1，2-二氯乙烷，置100ml容量瓶中。依法进样，得1，2-二氯乙烷峰定位色谱图。

C、样品溶液准确称取1g样品，置于5ml容量瓶中，用水稀释定容至刻度，摇匀，依法进样，得样品溶液色谱图。

D、专属性溶液准确称取1g样品，置于5ml容量瓶中，用对照溶液稀释定容至刻度，摇匀，得专属性溶液。依法进样，得专属性溶液色谱图。

结果

名称	保留时间（min）	理论塔板	拖尾因子
1，2-二氯乙烷	5.497	8087.2	1.0

2.5.3定量限与检测限

方法

精密量取线性贮备溶液适量，加水稀释成一系列不同浓度的溶液，摇匀后进样分析，当组分的信噪比S/N=10±1时，即为其定量限；当组分的信噪比S/N=3±1时，即为其检测限。

结果

定量限		检测限
杂质名称	1，2-二氯乙烷	杂质名称	1，2-二氯乙烷
S/N	10	S/N	4
浓度（ppm）	0.17	浓度（ppm）	0.08
噪音	35μV

2.6实际样品检测

方法

配制一份对照溶液，3批供试品溶液，依法进样分析，按外标法计算3批样品中1，2-二氯乙烷的含量。样品中1，2-二氯乙烷的含量不得超过0.0005%。

结果

批号	样品质量（mg）	对照溶液浓度（µg/ml）	1，2-二氯乙烷含量（%）
120201	1001.2	1.02	未检出
120202	1000.3	1.02	未检出
120203	1001.5	1.02	未检出