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液相色谱（LC）
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主题：液相色谱出峰问题

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yanmian
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发表于：2013/03/26 19:13:12 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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我用安捷伦高效液相色谱仪检测DNA的纯度，用乙腈和乙酸铵作流动相，跟去年做的时候用的条件完全一样，但是现在总是在进完样半分钟之后就出峰，并且整个分析过程只有0.5min的地方出峰。请教一下，这是什么原因，谢谢！
推荐答案：jgslhq回复于2013/04/07
这个首先要分清楚是流动相、仪器还是色谱柱的问题。0.5分钟就出峰，应该是溶剂峰，还有就是你的样品还在柱子上，没冲下来。
1.配置新的流动相走样，排除新的流动相的问题；
2.换新的色谱柱，或者用限流毛细管代替走样，确定是否能正常出峰，排除色谱柱的问题，说实话，我比较怀疑你的色谱柱在过年期间没有保存好。(你是怎么保存色谱柱的？)
3.最后仪器的问题的话，就是看看方法的压力是否和去年一样，比对一下有什么变化。
补充答案：

三人行回复于2013/04/09

凝胶色谱柱（水性）的保养与保存：
凝胶色谱柱需要注意防止微生物的生长，被微生物污染后的色谱柱将无法重现原来的分离效果与柱效，严重会使凝胶色谱柱报废。
为了抑制微生物的生长，可以使用低温保存。值得注意的是温度不能过低，以免冻结，为了不冻结可以提高保存时介质的离子强度。
常用的保存抑菌剂有：0.02%叠氮钠、0.002%洗必泰（hibitane，双氯苯双胍己烷）、0.01%-0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氢氧化钠。
也可以用一定量有机溶剂来保存，如20%乙醇。

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2013/3/26 20:22:22 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
DNA?多少分子量的?这个样子感觉是没保留,直接透过了,分子量过载的情况
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武灵
zhonghuashendun
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2013/3/26 23:40:35 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
可以上个图给各位专家老师看看吗？可能更好解答
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小鱼儿111126
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2013/3/27 9:43:55 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
以前是什么时间出峰啊？
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依旧
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2013/3/27 13:51:08 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
很诡异的事情，0.5分钟 也太快点了吧，以前做多久出峰呢？我觉得是不是0.5分钟出的是溶剂峰！
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leleyuyu1983
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2013/3/27 17:11:54 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
0.5分钟的峰肯定不是目标物的~  给个图跟色谱条件看看吧
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wlzj2008
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2013/3/27 18:50:22 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
肯定不是目标物
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guohui407
guohui407
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2013/4/7 10:55:55 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
没做过DNA
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北方海盗
herozxq
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2013/4/7 11:27:33 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
一可能是溶剂峰，二可能是杂质峰，三可能是样品分解的杂质峰，四可能是进样过程中仪器振动或碰动了（例如信号线），⑤可能是柱内有气泡，可以把柱反接冲一下，6可能是流通池脏了或气泡，反冲洗即可。欢迎来电咨询大连依利特郑工。
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jgslhq
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2013/4/7 13:59:37 9楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
这个首先要分清楚是流动相、仪器还是色谱柱的问题。0.5分钟就出峰，应该是溶剂峰，还有就是你的样品还在柱子上，没冲下来。
1.配置新的流动相走样，排除新的流动相的问题；
2.换新的色谱柱，或者用限流毛细管代替走样，确定是否能正常出峰，排除色谱柱的问题，说实话，我比较怀疑你的色谱柱在过年期间没有保存好。(你是怎么保存色谱柱的？)
3.最后仪器的问题的话，就是看看方法的压力是否和去年一样，比对一下有什么变化。
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三人行
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2013/4/9 23:31:12 10楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
凝胶色谱柱（水性）的保养与保存：
凝胶色谱柱需要注意防止微生物的生长，被微生物污染后的色谱柱将无法重现原来的分离效果与柱效，严重会使凝胶色谱柱报废。
为了抑制微生物的生长，可以使用低温保存。值得注意的是温度不能过低，以免冻结，为了不冻结可以提高保存时介质的离子强度。
常用的保存抑菌剂有：0.02%叠氮钠、0.002%洗必泰（hibitane，双氯苯双胍己烷）、0.01%-0.02%三氯丁醇、0.1mol/l氢氧化钠。
也可以用一定量有机溶剂来保存，如20%乙醇。
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