现在使用的柱子是waters xbrige c18,使用的仪器是安捷伦1100。
这根柱子原来一直是做碱性流动相的,一般是10MM碳酸氢胺水和乙腈梯度洗脱,今天我用它来做酸性流动相,用的是 0.05%tfa的水和 0.05%tfa的乙腈,洗脱条件是0-12分钟,水从95%到5%,12-15分钟保持95%不变,有5分钟的平衡时间。
现在的现象是,进空白的时候,从10分钟以后就不停的鼓包和出峰,这些峰在214NM的吸收大概250,230NM大概150,254NM大概25。现在我基本上已经排除了仪器的问题,换了一根同样的柱子也是同样的问题(这个色谱柱以前也一直是做碱性条件的)。
现在的问题是,为什么会出现这样的问题那?是不是我经常做碱性条件导致了色谱柱内的物质残留,然后今天做酸性条件把杂质重冲出来了?还是由于柱子使用时间久了(3年,非天天使用),里面的物质会随着流动相跑出来被紫外检测到了?
这个论坛里大神比较多,是否有哪位大神能帮我一下