主题:【求助】请教,区带电泳分离大豆分离蛋白的前处理方法???

浏览0 回复3 电梯直达
qie427
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,大豆蛋白很不容易溶解,用缓冲液溶解处理后,静止一段时间后上机,分离的效果不好,但是我之前用过同样的方法,却能分离出峰,可现在分离不开,只是出现小馒头峰,明显是分不开,
  求助,前处理的方法(较具体些)!!!
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芝兰
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可能是蛋白变性了,由于你的缓冲液中用了某种化学试剂破坏了蛋白的构象,而且静置时间越长变性越明显,如SDS就是一种。
另外你可以改变检测波长,通过降低检出限以获得好的峰形。
qie427
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我处理完马上上机和精置一段时间上机都试过了,图谱都差不多。可是奇怪的是,我前些日子做的和现在做的差很多,方法都一样啊,以前图谱分离的较好,有好的峰型出现,现在就没有分离开,是馒头峰.不同的是缓冲夜里现在加了纤维素和二硫代苏糖醇,但这两种药品起到使蛋白解聚的作用,应该效果更好啊,原因在哪儿,不知道啊 !
芝兰
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原因就在这两种药物,因为解聚不够完全,使蛋白呈现多种形态,而这就使各种形态的蛋白不能很好的分开,就没有很好的峰形了。
要么令其完全解聚,如加入8M尿素。
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