主题：【分享】生活饮用水中菌落总数测定的方法验证

目的：  通过对生活饮用水中菌落总数测定方法进行验证，证明我公司采用标准GB/T 5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标 菌落总数测定》规定的方法对生活饮用水中菌落总数的测定满足检测要求。
1 实验室基本情况

表1-1参加验证的人员情况表

姓名	性别	职务	所学专业	从事相关分析工作年限
A	女	微生物组长	食品科学与工程	5年
B	女	实验员	食品科学与工程	0.5年

表1-2使用仪器情况登记表

仪器名称	仪器型号	制造厂商	备注
生化培养箱	SPX-250B-Z	上海博迅实业有限公司医疗设备厂
立式压力蒸汽灭菌器	YXQ-LS-75SⅡ	上海博迅实业有限公司医疗设备厂
净化工作台	SW-CJ-1F	苏州博莱尔净化设备有限公司

表1-3使用试剂登记表

试剂名称	批号	生厂商	备注
氯化钠	160913	西陇科学股份有限公司
营养琼脂（NA）	171223	北京陆桥技术股份有限公司

2 方法验证过程
2.1 菌液制备：
挑取一粒大肠埃希氏菌（ATCC25922）磁珠置于BHI液体培养基中，24h过夜培养，使之菌悬液浓度在10⁹ CFU/mL，用无菌生理盐水按照10倍系列稀释法，稀释至10^-6~10^-7。
2.2 样品制备：
2.2.1 试验组：取25 mL2.1中制备的菌液，加入到225 mL无菌盐水中，制成每毫升10 CFU~100 CFU的样品原液，作为试验组。
2.2.2 供试品组：不添加任何菌的相同样品。
2.3 培养基/试剂制备：
2.3.1按GB4789.28-2013食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求配制。
2.3.2根据供应商提供的配制说明进行配制。
2.4 实验操作：
2.4.1 接种及培养：选择3个稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于无菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。同时，分别吸取1 mL空白稀释液加入两个无菌平皿内做空白对照。及时将15-20 mL冷却至46℃的NA倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后，36℃±1℃倒置培养48 h±2 h。为防止蔓延，可在琼脂凝固后在表面覆盖一层约4 mL的琼脂。
2.4.2验证试验采用空白对照、人员比对进行试验，并分别计算实验结果及人员比对结果。
2.5 测试数据：

人员	实验组别	稀释度				检测结果	平均结果
		100		10-1		CFU/mL	CFU/mL
B	试验组-1	39	33	3	4	36	36
	试验组-2	35	37	4	3	36
	供试品组-1	0	0	0	0	＜1	＜1
	供试品组-2	0	0	0	0	＜1
A	试验组-1	42	36	4	4	39	40
	试验组-2	38	41	4	4	40
	供试品组-1	0	0	0	0	＜1	＜1
	供试品组-2	0	0	0	0	＜1

r（B）=log³⁶—log³⁶=0.00＜0.25

r（A）=log⁴⁰—log³⁹=0.01＜0.25

重复性：单人两次独立的单次实验结果的绝对差值，不应大于重复性限r=0.25，以10为底每g（或ml）中微生物计数的对数。

R=log⁴⁰—log³⁶=0.05＜0.45

复现性：人员比对结果符合标准要求，两人单次试验结果的绝对差值，不应大于复现性限R=0.45，以10为底每g（或ml）中微生物计数的对数。
2.7是否对方法偏离？
□是    ■否
2.8 结论
根据GB/T 5750.12-2006 《生活饮用水 菌落总数测定》要求依法检测，试验人员比对结果符合规定。

故我公司对食品中菌落总数的测定符合标准GB/T 5750.12-2006 《生活饮用水菌落总数测定》的要求。