主题：【原创】未分离峰定量示例2----二氢茉莉酮酸甲酯和龙涎酮合峰处理

未分离峰定量示例2----二氢茉莉酮酸甲酯和龙涎酮合峰处理

网友发帖：日化香精中的龙涎酮和二氢茉莉酮酸甲酯如何更好地定量，参考链接https://bbs.instrument.com.cn/topic/7403742

问题是：请教各位老师，在日化香精中，龙涎酮与二茉峰重合，特征离子也重合，大家是如何很好地定量的？

几个网友也参与提出好的建议，有提取离子定量，有amdis等处理方式。下面讨论一下利用单一离子面积计算估计化合物面积的方法来进行定量。

1.    样品合峰初步分析

此样品总离子图如下：

图1  总离子色谱图TIC

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其中36.91min为二氢茉莉酮酸甲酯和龙涎酮合峰

图2  36.91min二氢茉莉酮酸甲酯和龙涎酮合峰色谱图

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36.91分钟色谱图的质谱图如下：

图3  36.91分钟色谱图的质谱图

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经过检索36.91分钟为二氢茉莉酮酸甲酯和龙涎酮的离子加和：

图4  36.91分钟检索结果

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提取两个化合物的最大离子m/z191和m/z83得到两个化合物的分布图如下：

图5  提取两个化合物的最大离子m/z191和m/z83得到两个化合物的分布图

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2.    利用二氢茉莉酮酸甲酯质谱单一离子面积计算估计化合物面积的方法来进行定量

找到一个含二氢茉莉酮酸甲酯样品（可惜不是同一实验室的样品例子）来计算m/z83离子面积占化合物总面积的比例。

图6 二氢茉莉酮酸甲酯质谱图

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积分二氢茉莉酮酸甲酯总面积为45224507，如下。

peak R.T. first  max last  PK  peak      corr.  corr.  % of

  #  min  scan scan scan  TY height    area    % max.  total

26 32.534  6513 6658 6683 BV    385657 45224507 100.00%  13.064%

积分m/z83离子的面积为10622419（仅计算反式异构体，顺式异构体在后面，保留时间不同）。

Ion 83.00 (82.70 to 83.70): 20191123-1.D\data.ms

Peak #    RetTimeType      Width    AreaStartTime      End Time

1    32.546    BB        0.136          10622419  32.144    32.657

2    33.317    BB        0.067            1234446    33.146    33.464

可以看出m/z 83离子积分面积占总面积的比例为：

10622419/45224507*100=23.88%

对未分离网友的溢隆香水样品的m/z83离子积分，结果如下：

Ion 83.00 (82.70 to 83.70): 28.D\data.ms

溢隆香水

Peak #    RetTimeType      Width    AreaStartTime      End Time

7    36.912    BV        0.144          155890252  35.860    37.024

即二氢茉莉酮酸甲酯的大致面积为：155890252/23.88%=652806750

积分未分离样品36.91分钟色谱峰，得到总面积为2953123137（所有离子积分面积）。

peak R.T. first  max last  PK  peak      corr.  corr.  % of

  #  min  scan scan scan  TY height    area    % max.  total

--- ----- ----- ---- ---- --- -------  -------  ------ -------

88 36.911  5640 5746 5765 VV 511550053 2953123137100.00%  23.603%

即ISO E Super的面积为：2953123137-652806750=2300316387

即二氢茉莉酮酸甲酯：龙涎酮的大致面积比例为：652806750：2300316387 = 1：3.524

3.    利用龙涎酮质谱单一离子面积计算估计化合物面积的方法来进行定量

同样可以利用iso E super龙涎酮的m/z191离子来估计估算龙涎酮的面积。

找到另一个含龙涎酮的样品，此龙涎酮不是很大，这样可能会引起误差的，当然最好是同一实验室龙涎酮含量适中的例子，可惜我手头没有。

图7 含龙涎酮样品色谱图和质谱图

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对m/z191离子进行积分，得到面积值为51231426，如下。

Ion 191.00 (190.70 to 191.70):20191028.D\data.ms

SP

Peak #    RetTimeType      Width    AreaStartTime      End Time

3    62.225    PV        0.062          51231426    62.107    62.389

对龙涎酮所有离子积分，即总面积为296362852，如下。

peak R.T. first  max last  PK  peak      corr.  corr.  % of

  #  min  scan scan scan  TY height    area    % max.  total

--- ----- ----- ---- ---- --- -------  -------  ------ -------

76 62.225  14651 14671 14698 VV  6893554 296362852  21.20%  3.090%

可以看出m/z 191离子积分面积占总面积的比例为：

51231426/296362852*100=17.288%

再看看未分离样品的情况：对m/z191进行积分。

Ion 191.00 (190.70 to 191.70): 28.D\data.ms

溢隆香水

Peak #    RetTimeType      Width    AreaStartTime      End Time

8    36.740    VV        0.305          340318910  36.271    36.927

9    36.978    VV        0.071          69389987  36.927    37.024

可以看到是两个面积，这是因为原来36.91分钟的m/z191离子分布如下（注意m/z83是单峰，请对照图5）：

图8  样品36.91分钟的m/z191离子分布

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即m/z191离子积分面积为340318910+69389987=409708897

409708897/17.288%=2369903384和2300316387相差不大，可以接受。

由于这两个二氢茉莉酮酸甲酯和龙涎酮的纯净质谱图均来自别的网友的数据，不是原来样品网友的数据，因为不同调谐参数和分析条件会引起误差的。如果使用自己在相同条件的香料样品测定得到的质谱图，估算会更准确。