联苯胺是重要的染料中间体，联苯及其衍生物广泛用于各种染料合成，其种类多达250种。4,4'-二氨基联苯及其盐都是有毒且会致癌的物质，进入体内，引起皮炎，刺激黏膜，损害肝和肾脏，且会造成膀胱癌和胰腺癌。联苯胺的浓度只要达到6.7ppb，对人体就有致癌的风险，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，4,4'-二氨基联苯（联苯胺）在一类致癌物清单中，因此，建立一套快速处理、富集水中联苯胺并检测的方法是非常有必要的。本文使用全自动固相萃取系统对水中联苯胺进行固相萃取富集，用高效液相色谱仪进行检测。

本文参考“HJ 1014-2019 水质联苯胺的测定高效液相色谱法”采用SPE1000配置两种不同类型的固相萃取柱，测试其对联苯胺的回收效果，经过实验， SCX固相萃取柱的回收率在75.6%~83.2%之间，重现性RSD在2.8%~5.2%之间；HLB固相萃取柱的回收率在81.0%~91.9%之间，重现性RSD为6.0%。两种萃取柱均得到较好的回收率和良好的重现性，说明SPE-1000全自动固相萃取系统可靠稳定，适用于大体积水中的联苯胺样品前处理。

关键词：联苯胺，SPE-1000全自动固相萃取系统，高效液相色谱法（荧光检测器）

1 SCX萃取柱实验过程

1.1仪器与试剂

SPE-1000全自动固相萃取系统；

LC600高压高效液相色谱仪；

联苯胺，＞99.5%；

甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；甲酸（分析纯）；乙酸（分析纯）；

SCX固相萃取柱规格；

自来水；超纯水。

1.2混合标准工作液的配制

取一定量的联苯胺标品于10mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为1000 μg/mL,用甲醇稀释成1 μg/mL标准工作液，用甲醇水溶液（V:V=1:1）依次配置成浓度分别为5μg/L、10μg/L、50μg/L、100μg/L、200μg/L的混合标准工作液。

1.3试验方法

1.3.1样品准备

取150 mL水样，加入8 mg硫代硫酸钠，超声10 min，用盐酸或者氢氧化钠将水样调至PH=5-6（蒸馏水无需调节PH），在分别加入60 μL、150 μL的标准工作液，使待测水样中联苯胺的加标浓度分别为0.40μg/L，将样品混匀待处理。

1.3.2 固相萃取及浓缩

按照图1所示的方法进行SPE-1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，进行30℃氮吹至1 mL，水定容至2 mL，待检测。

图1 水中联苯胺的SPE富集方法

1.3.3 HPLC测定水中联苯胺

色谱柱： C18，5μm，4.6mm*150mm；

波长：激发波长：292 nm，检测波长395 nm；

流速：1.0mL/min；

进样量：20μL；

流动相：乙酸铵：乙腈=85:15（0.05%甲酸）

2试验结果

2.1水中联苯胺色谱图

2.1.1水中联苯胺标品色谱图

图2为取30 μL的混合标准工作液用甲醇：水（1：1）定容到1.0 mL检测，联苯胺标品出峰色谱图，出峰时间分别为6.1min。

图2 联苯胺标品出峰色谱图

2.1.2水中联苯胺加标样品色谱图

图3联苯胺加标样品出峰色谱图，出峰时间为6.1min，

图3联苯胺加标样品出峰色谱图

2.4 联苯胺线性

联苯胺线性如下图4。

图4联苯胺线性图

2.3 HPLC测定水中联苯胺回收率

HPLC测定蒸馏水中联苯胺回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率均在75.6%~83.2%之间，重现性RSD为2.0%。

表1 蒸馏水中联苯胺的回收率（加标浓度0.4 μg/L）

名称

编号

回收率（%）

平均

(%)

RSD

联苯胺

78.7

80.0

79.6

80.1

81.9

83.0

80.6

2.0

HPLC测定自来水水中联苯胺回收率计算结果如下表，萃取富集后的回收率均在78.7%~83.2%之间，重现性RSD在6.4%。

表1 自来水中联苯胺的回收率（加标浓度0.4 μg/L）

名称

编号

回收率（%）

平均

(%)

RSD

联苯胺

80.3

79.8

80.9

83.2

94.2

84.4

83.8

6.4

3 HLB萃取柱试验过程

3.1仪器与试剂

SPE-1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

LC600 一元高压高效液相色谱仪（莱伯泰科公司）；

联苯胺，＞99.5%，远航试剂厂；

甲醇（色谱纯）；乙腈（色谱纯）；甲酸（分析纯）；乙酸（分析纯）；

HLB固相萃取柱（沃特世）

自来水，超纯水。

3.2标准工作液的配制

取一定量的联苯胺标品于10mL容量瓶中，用甲醇定容，浓度为1000 μg/mL，用甲醇稀释成1 μg/mL标准工作液，用甲醇水溶液（V:V=1:1）依次配置成浓度为30 μg/L的混合标准工作液。

3.3试验方法

3.3.1样品准备

取150 mL自来水样品，加入8 mg硫代硫酸钠，超声10 min，用盐酸或者氢氧化钠将水样调至PH=6~9，在分别加入60 μL的标准工作液，使待测水样中联苯胺的加标浓度分别为0.40μg/L，将样品混匀待处理。

3.3.2 固相萃取及浓缩

按照图5所示的方法进行SPE-1000方法编辑，并加载方法到相应通道，进行样品的固相萃取。收集洗脱液到收集瓶中，进行32℃氮吹至1 mL，水定容至2 mL，待检测。

图5 水中联苯胺的SPE富集方法

3.3.3 HPLC测定水中联苯胺

色谱柱： C18，5μm，4.6mm*150mm；

波长：激发波长：292 nm，检测波长395 nm；

流速：1.0mL/min；

进样量：20μL；

流动相：乙酸铵：乙腈=85:15（0.05%甲酸）

4试验结果

4.1水中联苯胺色谱图

4.1.1水中联苯胺标品色谱图

图6为取30 μL的混合标准工作液用甲醇：水（1：1）定容到1.0 mL检测，联苯胺标品出峰色谱图，出峰时间分别为6.6min。