核心提示:一、维生素A目前维生素A都是合成的,来源:(1)从动物肝脏中得到;(2)从维生素前体而得到(维生素前体:主要指类胡萝卜素,
一、维生素A
目前维生素A
都是合成的,来源:(1
)从动物肝脏中得到;(2
)从维生素前体而得到(维生素前体:主要指类胡萝卜素,主要是β-
胡萝卜素)维生素A
的测定常用的方法有三氯化锑比色法、紫外分光光度法、荧光分析法、液相色谱法。对于三氯化锑比色法适用于样品中含V
A高的样品,方法简便、快速、结果准确,但是对维生素A
含量低的样品,如每克样品中含5
~10
μg
维生素A
时,这时样品由于受其脂溶性物质的干扰,不应用比色法测定。对于紫外分光光度法不必加显色剂显色,可直接测定维生素A
的含量,对样品中含V
A低的也可以测出可信结果,操作简便、快速。1
、维生素A
的性质⑴ 因有许多不饱和链,故见光易分解;⑵ 在缺氧情况下,对热较稳定,对光特别敏感。如测强化奶粉时,速度要快,一般要求测定时间长短,因为时间长,见光时间长,见光分解,故测出的比出厂的含量要少;⑶ 对碱稳定;2
、测定步骤⑴ 样品用有机溶剂萃取脂类样品可以根据脂肪的测定处理脂肪,即索氏抽提法,采用乙醚作提取剂,也可用热苯回流方法提取脂类。如果样品中含蛋白质和淀粉多的情况下可采用乙醚提取法。⑵脂类的皂化脂类有维生素和脂肪这两部分通过皂化(50%KOH
、无水C
2H
3OH
、热回流)把它们分开,得到一部分皂化物和一部分不皂化物。皂化条件:(1
)C
2H
3OH
︰脂类 = 8
︰1
;(2
)KOH
量 =
脂量×皂化价(mg
)×2.5
;(3
)皂化温度与时间:70
℃、30
分钟在皂化时可以加入抗氧剂连苯二酚和对苯二酚,防止氧化。⑶ 提取:不皂化物和皂化物经水、苯、乙醚萃取可得到不皂化物。⑷ 柱层析分离干扰物质采用柱层析分离干扰物质,如果柱层析把β-
胡萝卜素也洗脱下来,那么这时维生素A
与β-
胡萝卜素就是一个混合物,还要将它们分离开。如果样品中只有维生素A
而不含β-
胡萝卜素时,这时可直接定容。维生素A
与β-
胡萝卜素分离:吸附剂: 8
分中性Al
2O
3和2
分碱性Al
2O
3混合,装柱分离方法:a.
用2%
丙酮石油醚洗β-
胡萝卜素; b.
用乙醚洗V
A。3
、测定方法⑴ S
bCl
3比色法维生素A
/CHCl
3 + S
bCl
3/CHCl
3→形成兰色物质→在620
nm有最大吸光峰这种兰色物质不稳定,很快褪色或变成其它物质,所以在分析时最好在暗室中进行,并且做标准曲线。计算:每百克样品含V
A的量= C
×(V1/V2
)×(100/W
)C
:从标准曲线上查得V
A的量V
1 : CHCl
3定容的量V
2 : 测定所取样液体积⑵ 紫外分光光度法a.
原理:V
A为脂溶性的,测定V
A时必须先将样品中的脂肪抽提出来进行皂化,萃取不皂化部分,在经柱层析除去杂质等干扰物质,在紫外328
nm下测定,求出含量。b.
方法1) 提取及皂化称样10.00g
→ 于烧杯中 → 加40ml
水搅匀 → 移250ml
分液漏斗中 → 加氨水5ml
→ 加乙醇35ml
→摇匀 → 用乙醚抽提(每次40ml
抽提三次) → 收集乙醚层 → 用10ml
水洗乙醚层三次 →水层再用30ml
乙醚抽提一次 → 合并所用乙醚 → 用索氏法除乙醚→ 待瓶中乙醚除尽后 → 加30ml80%
的KOH
→ 40mlC
2H
5OH
→加0.8g
焦性没食子酸 → 83
℃水浴30
分钟(皂化脂肪)→ 冷却后移入250ml
分液漏斗中 → 加60ml
水 → 用40ml
乙醚抽提三次 →合并乙醚抽提液 → 用水洗至中性 →用索氏法除乙醚 → 除去后用5ml
石油醚溶解瓶中内容物 → 然后移入刻度试管中2)层析在层析柱内装8cm
高度中性氧化铝 → 2cm
高度碱性氧化铝及1cm
无水硫酸钠 → 以石油醚浸透 → 装皂化后的样液慢慢于柱内→ 用1
~2ml
石油醚洗试管 → 洗液倒入柱内,活塞打开以每分钟为35
滴左右的速度打开,当液面降到接近硫酸钠时 → 加5ml
石油醚→ 随后用5ml
洗脱液逐次洗涤。层析柱上第一个黄色层析层,一般是β-
胡萝卜素,此带在12%
洗脱液前后洗去,收集于10ml
容量瓶中直到流出物不呈黄色为止,此层可测β-
胡萝卜素用,而V
A一般在50%
洗脱液洗出,用2ml
刻度吸管收集1ml
。吸约0.2ml
于小试管中→加0.3ml25%
三氯化锑→溶液如呈兰色→表明有V
A存在,故0.5ml
用石油醚定容10ml
。3)样液测定以石油醚为空白4)计算 VA(I.μ
100G)=(E×10
6×2)/(1830×100×W)×(1000/0.3)
0.3
:每0.3
μg V
A相当于1 I.
μE
: 消光值 W
: 样品重量(g
)1830
:石油醚中其消光值1%cm
为1830
(I.
μ): 一个国际单位,维生素A
相当于0.6
μg
β-
胡萝卜素。4、试剂⑴ 50%KOH
;⑵ 无水硫酸钠;⑶ 乙醚(不含过氧化氢);⑷ 石油醚;⑸ 苯;⑹ 45%C
2H
5OH
(应不含醛类物质)酒精中含醛类的检查方法:首先配银氨溶液,在50%
硝酸银溶液中加入浓氨水,直到氧化银沉淀又重新溶解为止,在小试管中加2ml
银氨溶液,加3
~5
滴酒精,摇匀,加10%N
aOH 1
滴加热,若有银镜反应,表示乙醇中含有醛。脱醛处理:取乙醇2000ml
→ 加A
gNO
32g
→ 振摇溶解 → 加NaOH 4g
→振摇溶解 → 过滤 → 上清液 → 蒸馏 → 即可⑺ 20
~25% S
bCl
3的CHCl
3先量取100mlCHCl
3于广口瓶中,用减差法称取一定量的干燥S
bCl
3,S
bCl
3易吸水,所以必需蒸馏重结晶后使用,一般用沙浴上加热。二、维生素D
维生素D
在鱼肝油和鸡蛋黄等食品中含量较多,一般成人不会缺V
D,而婴儿容易缺乏。1
、操作步骤⑴ 提取样品(奶粉)+水→混匀 在NH4OH的作用下
酪蛋白Ca
盐溶解加入乙醇使脂肪球分离→乙醚、石油醚萃取得到脂质(其它样品可用索氏提取得到脂质)⑵ 皂化在奶粉中脂溶性物质有V
D、β-
胡萝卜素、V
A、V
E、甾醇、脂肪。目前皂化有三种情况:低温(室温) | 中温(70℃±2℃) | 高温(100℃15min) |
低碱 | 低碱 | 低碱 |
回收率不完全 | 回收率46% | 回收率70% |
低碱 =
脂肪︰KOH
为1
︰2.5
的关系另外在皂化时加抗氧化剂与不加抗氧化剂回收率不一样,加抗氧化剂的回收率高于不加抗氧化剂的回收率。有人将上面的皂化条件互补,采用中温-
高碱并加抗氧化剂,这样的回收率为96.8%
,效果较好。故皂化条件 :70
℃±2
℃高碱 +
抗氧化剂⑶ 萃取⑷ 除甾醇甾醇在食品中含量较多,主要是通过柱子,这个柱子就是毛地黄皂甙。甾醇 +
毛地黄皂甙 → 沉淀洗脱液用乙醚︰己烷 = 1
︰5
配制而成甾醇︰毛地黄皂甙 = 1
︰14
用量⑸ 皂土柱层析当V
D与V
A共存时,须用皂土柱层析除V
A及V
A的分解产物。测定方法有两种:比色法:
维生素A
/CHCl
3 + S
bCl
3/CHCl
3/乙酰氮 → 形成橙黄色物质 → 500
nm下测定紫外分光光度法 V
D/乙醇 → 265
nm下测定