配置EN标曲,需要添加衍生试剂、混标、内标、缓冲液、萃取剂,同事第一次跟我交接配制方法的时候,我问加液是否有先后顺序?同事说全部加在一起就行无所谓顺序。我想反正试剂要混合在一起震摇30分钟充分衍生,所以先加的衍生试剂,再加的内标和混标。结果用
GCMS上机后发现STD1-STD10里很多物质没走出来,需要衍生的内标也差的很大,但是不需要衍生的内标和物质走的很稳定,所以不是配液过程中试剂量添加错误,是衍生出了问题。
之后我问了主管和另一个同事,说配制过程中衍生试剂要最后加,问原因他们说不清楚,只知道之前有同事验证过先加衍生试剂会导致出问题,所以之后都默认成了后加。
想请教一下大家,这是什么原理?物质和衍生试剂不是最终都要混合在一起衍生30分钟吗?为什么添加的先后顺序会影响衍生效果?