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主题：【分享】【金秋计划】石斛生物碱对四氯化碳诱导急性肝损伤线粒体ROS介导的坏死性凋亡的抑制作用

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发表于：2024/09/03 22:19:01 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
急性肝损伤(ALI)是突然和大量肝细胞损伤的严重后果。线粒体是多种药物和化学物质引起的药物性肝毒性的重要靶点。最近的证据表明，线粒体功能异常可触发各种肝脏疾病的发生，并有助于感染、毒素和药物滥用引起的ALI 。线粒体扰动也会影响肝功能的恢复，改善线粒体功能一直是探索包括ALI在内的各种肝脏疾病潜在治疗方法的热门研究领域。

金钗石斛(DNL)是载入《中国药典》(2020年版)的著名中药。先前的数据表明，金钗石斛生物碱(DNLA)通过减少氧化应激和改善线粒体功能来保护CCl4诱导的肝损伤，但确切的调控信号通路尚不清楚。

该研究旨在探讨坏死性凋亡在CCl4诱导的肝损伤模式中的作用，并确定DNLA是否通过抑制线粒体ROS (mROS)介导的坏死性凋亡对CCl4诱导的急性肝损伤(ALI)有保护作用。
从DNL中提取DNLA，采用液相色谱-质谱(LC-MS)法测定其含量。采用C57BL/6J小鼠进行体内实验。先给药DNLA (20 mg/kg/d, ig) 7 d，然后给药CCl4(20 μL/kg, ip)。通过小鼠血清生化指标评估和苏木精伊红(H&E)染色对肝组织进行组织病理学检查，评价CCl4对小鼠肝损伤的影响。采用western blotting和实时荧光定量PCR (RT-qPCR)检测蛋白和基因表达。使用荧光探针DCFH-DA检测活性氧(ROS)产生，使用荧光探针JC-1评估线粒体膜电位。采用荧光探针MitoSOX检测线粒体ROS (mROS)水平。

DNLA减轻CCl4诱导的肝损伤，表现为降低AST和ALT水平，改善肝脏病理。DNLA通过降低RIPK1、RIPK3和MLKL磷酸化抑制坏死性凋亡，同时增强线粒体功能。它还打破了mROS与RIPK1/RIPK3/MLKL激活之间的正反馈循环。在白藜芦醇和线粒体SOD2过表达中观察到类似的结果，两者都减轻了mROS和坏死性凋亡。进一步的机制研究发现，DNLA抑制RIPK1的氧化并降低其磷酸化水平，从而降低RIPK3和MLKL的磷酸化水平，阻断坏死性凋亡，减轻肝损伤。

DNLA通过减少mROS介导的RIPK1氧化，从而降低RIPK1、RIPK3和MLKL的磷酸化，抑制坏死性凋亡信号通路，对肝损伤具有保护作用。
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