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主题：【第十七届原创】C57小鼠左肺原位种植成瘤实验

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Ins_564515b5
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发表于：2024/10/08 22:34:03 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
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C57小鼠左肺原位种植成瘤实验

细胞准备：

1. 按照正常传代过程，收集、离心、吹散，制成细胞悬液

2. 细胞计数板计数细胞悬液的细胞浓度

3. 含matrigel胶的细胞悬液制备原则：1.每只C57小鼠原位注射20ul的含matrigel胶的细胞悬液 2.细胞悬液与matrigel体积比为1:1，即全部需要的细胞数量均包含于细胞悬液中，然后与等体积的matrigel胶均匀混合 3.在节约实验成本的前提下，为保证实验顺利进行，一般含matrigel胶的细胞悬液均按照实际需要量的2倍进行准备

4. 根据含matrigel胶的细胞悬液制备原则及实际需要原位注射的小鼠数量和细胞数量，制备相应的含matrigel胶的细胞悬液

5. 以注射5只C57小鼠，每只小鼠注射1x105细胞为例：根据细胞计数板计数的细胞浓度，适当稀释或者浓缩细胞悬液，配制细胞浓度为1x107cells/ml的细胞悬液，取上述细胞悬液100ul，使用预冷的枪头的EP管，将该100ul细胞悬液与100ul matrigel胶在冰上均匀混合，得到共200ul的含matrigel胶的浓度为5x103cells/ul的细胞悬液，每只C57小鼠注射20ul，即1x105cells，细胞悬液共200ul，为实际需要量的2倍

6. 冰上保存制好的细胞悬液，尽快进行小鼠原位种植

原位种植实验操作：

1. 实验操作台及相关实验物品的准备，实验器械的消毒酒精棉球擦拭消毒

2. 使用预先、新近配置的1%的戊巴比妥溶液，每只C57小鼠按照10ul/g的量进行腹腔注射，用以麻醉小鼠，一只体重20g的C57小鼠需要腹腔注射200ul浓度为1%的戊巴比妥溶液

3. 约3分钟之后，C7小鼠进入麻醉状态，准备进行实验

4. 在清洁、消毒过的试验操作台或木板上，纵向、左胸侧向外、头朝上尾朝下放置麻醉状态的C57小鼠，使用蘸有75%消毒酒精的棉团轻轻擦拭小鼠左胸外侧

5. 使用眼科剪，在C57小鼠左胸外侧正中线、左前肢下方、左胸腔肋骨上缘处做纵向开口，长度约0.5cm，深度为剪开胸腔外侧平滑肌层，不可过深至胸腔内，不可过浅至皮肤真皮层

6. 使用眼科镊轻轻拨开剪口并上下移动，查找小鼠心肺交界，确定入针点

7. 使用1ml注射器吸取含matrigel胶的细胞悬液，排尽注射器内空气，在确定的入针点进针，进针深度约0.5cm，根据针头触感确定是否进针入肺实质

8. 轻轻推送20ul含matrigel胶的细胞悬液，停针静止约5s后轻轻拔出注射器

9. 使用手术缝针缝合小鼠左胸外侧切口

10. 将小鼠放回饲养笼内，检查饲料及饮水，在鼠笼标签做好完整的相关实验标记，将鼠笼放回原处
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