1)使用前: a. 检查色谱柱包装和标签:确保色谱柱没有物理损伤,确认色谱柱的规格和填料类型符合实验需求。 b. 阅读说明书:仔细阅读色谱柱的使用说明书,了解色谱柱的pH稳定性范围、最大操作压力等参数。 c. 色谱柱保存液置换:新色谱柱采用梯度洗脱的方式,逐渐改变溶剂组成,使色谱柱从一种状态平稳过渡到另一种状态。 2)使用中: a. 流动相选择:流动相中应至少保持5%的极性溶剂,如5%水相缓冲液或3%甲醇/2%水相缓冲液等,以保证HILIC硅胶填料始终被水浸润。同时,有机溶剂(如乙腈)的比例不应低于40%。避免使用磷酸盐缓冲溶液体系,因为磷酸盐在HILIC色谱模式下可能会析出。 b. 样品溶解性:样品应尽量溶解在与流动相组成相同的溶剂中。若使用含水量高的溶剂,可能会导致分离能力降低。建议使用含有机溶剂50%以上的溶液进行稀释。 c. 色谱柱的平衡:在开始进样前,用20倍柱体积的起始流动相平衡色谱柱。进行梯度分析时,进样间隔需要用10倍柱体积起始流动相平衡色谱柱。d. 色谱柱的温度:HILIC色谱柱对温度敏感,因此在使用过程中需要控制好柱温,一般推荐的柱温范围为20-40℃。 e. pH控制:HILIC色谱柱在分析过程中可能受到溶剂pH的影响,因此对于一些对pH敏感的化合物,需要进行pH调整以获得更好的保留和分离效果。f. 色谱柱的压力:避免超过色谱柱的最大使用压力,通常不超过20MPa。 3)使用后:
a. 柱子清洗:如果色谱柱被污染,可以使用50/50的乙腈/水溶液清洗以去除极性污染物。如果清洗无效,可使用更高比例的乙腈/水溶液进行清洗。
b. 柱子保存:短期内不使用色谱柱时,应将其保存在95%乙腈中。长期不使用时,先用10倍柱体积的HPLC级水清洗色谱柱,然后换上95%乙腈保存。
c. 记录使用情况:记录色谱柱的使用情况,包括分析的样品、使用条件和色谱柱表现,以便于追踪柱效和寿命。