主题：【分享】高效液相色谱基础篇|关于亲水作用色谱柱维护保养及注意事项小知识

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发表于：2024/10/10 16:21:26 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

承接上回，我们说了一下HILIC色谱柱的原理、构造、分离机制、使用过程中的注意事项及它的局限性，今天主要说说它的维护保养和相关的注意事项，色谱柱固有一死，但好的操作还是能延缓它的生命周期的。其实不同的色谱柱都大差不差，只是在某几个点上是略有不同的，大部分都是属于共性的维护和注意事项。

01.HILIC色谱柱的维护

1）色谱柱的柱效测试：在条件允许的情况下，对新色谱柱进行测试。

2）色谱柱平衡：新柱或长时间未使用的色谱柱应先用高比例的有机溶剂冲洗，然后逐渐过渡到使用流动相，以达到平衡。

3）色谱柱保护：对于复杂样品，建议使用在线滤器或保护柱，或者使用SPE小柱进行前处理。

4）色谱柱清洗：常规清洗包括使用高比例的有机溶剂冲洗，以去除残留的极性物质。对于强保留污染物，可能需要使用更高比例的有机溶剂或含有少量水的溶剂进行清洗。

5）色谱柱保存：色谱柱应在适宜的温度下保存，并且根据制造商的建议使用合适的保存液。如果长时间不用，应该用保存液进行冲洗，确保里面填料不会干涸。

6）使用保护柱：对于容易污染的样品，建议使用保护柱来延长分析柱的寿命。

7）记录维护：记录色谱柱的使用和维护历史，包括使用日期、样品类型、清洗和再生周期等。

8）更换柱子：当色谱柱性能下降，如出现峰形异常、柱效降低或分离度下降时，考虑更换新柱。

02.HILIC色谱柱的注意事项

1）pH范围：虽然HILIC对pH的敏感性不如离子交换色谱，但流动相的pH值应控制在适合分析物的范围内。
2）温度控制：避免长时间在极端温度下使用色谱柱，一般推荐使用温度不超过室温。
3）样品清洁度：样品应尽可能干净，避免含有悬浮颗粒、聚合物或其他可能堵塞或污染色谱柱的物质。
4）样品溶解性：样品最好溶解在流动相或与之兼容的溶剂中，以减少柱床的污染。
5）流动相组成：HILIC通常使用高比例的有机溶剂作为流动相，确保流动相的组成适合分析目标。
6）缓冲盐选择：使用适合HILIC的缓冲盐，如氯化铵或醋酸铵，避免使用可能与分析物反应的缓冲盐。
7）避免高压：在冲洗或使用过程中，避免对色谱柱施加过高的压力，这可能导致填料压缩或床层损坏。
8）避免极端条件：避免在超出色谱柱制造商规定的pH、温度或有机溶剂比例的条件下使用色谱柱。
9）避免水解：由于HILIC色谱柱可能对水敏感，应避免长时间暴露在高水分环境中。
10）定期平衡：新柱或长时间未使用的色谱柱在使用前应进行适当的平衡。

总结一下：
要确保HILIC色谱柱的长期稳定和高效，我们得做好日常的维护和保养。首先，新柱子使用前，进行柱效测试是必要的，以确保它出厂后使用前是正常的。使用前，先用合适的溶剂冲洗色谱柱，然后用流动相进行平衡，这有助于保证实验的一致性。如果样品比较复杂，最好用保护柱或在线过滤器，这样可以减少对色谱柱的污染。在操作过程中，要留意几个关键点：保持流动相的pH值在色谱柱允许的范围内，控制好色谱柱的使用温度，确保样品的清洁度，使用新鲜配制的流动相。同时，避免施加过高的压力，不要超出色谱柱制造商规定的使用条件。使用结束后，清洗色谱柱也很重要，通常使用高比例的有机溶剂（如乙腈或甲醇）进行冲洗，以去除残留的极性物质；对于难以去除的污染物，可能需要使用含有少量水的有机溶剂进行冲洗；同时，色谱柱在不使用时，应使用高比例的有机溶剂（如乙腈或甲醇）保存，以防止填料吸水膨胀或干涸。最后，记录色谱柱的使用和维护历史对于跟踪其性能变化非常关键。如果色谱柱的性能开始下降，比如峰形异常或柱效降低，那就该考虑换新柱子了。

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