主题：【求助】什么地方有免疫组化方面的基础知识啊

免疫组化常见问题的处理

当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。
对照/标本无染色
    ① 确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。
    ② 确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。
    ③ 对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必须是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。
    ④ 检查抗体所使用的稀释度及稀释溶液。
    ⑤ 检查抗体的有效期和保存条件，尤其是标记了酶或荧光素的抗体，现在大多数试剂公司的抗体均要求在4~8℃条件下保存，应避免反复冻融，试剂保存时一定要避免与挥发性有机溶剂同放一室，以免降低抗体的效价。
    ⑥ 检查标本的储存条件，最好用已知阳性的标本来同时做阳性对照。
    ⑦ 检查色原/底物溶液，最简单的检测方法是将一滴标记有酶的抗体加入到制备好的底物溶液中，如果底物发生预期的颜色变化，则可排除底物的因素。需要注意的是，有些底物在制成工作液后应在一定时间内用完，否则会失效。
    ⑧ 检查冲洗液是否和反应试剂匹配，溶液的pH值很重要，与过氧化物酶底物匹配的溶液中不应含有叠氮钠。
    ⑨ 检查复染剂和封片剂是否和所使用的色原匹配。

弱阳性
    如果阴性对照没有染色而阳性对照标本弱阳性，除了考虑上述因素外，还应考虑：
    ① 标本的固定方式，不当的固定方式或固定时温度过高，都会影响到所检测的抗原的数量和质量。
    ② 不适当的抗原修复方式，由于石蜡切片在制作的过程中固定剂对抗原的封闭作用，必须用抗原热修复或酶消化或两种同时使用的抗原双暴露法，至于使用哪一种方法，应参照生产厂家的说明，同时结合标本的具体情况而定。
    ③ 抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度/时间是否正确。一般试剂生产厂家都会对试剂给出一定的使用范围，但是由于使用者的标本来自各种组织，处理过程也不尽相同，所以应参照使用范围，对所使用的一抗进行梯度测试，找出最佳的使用浓度。
    ④ 切片上遗留了过多的冲洗液，当抗体加至切片上时，等于人为地对抗体进行了进一步的稀释。
    ⑤ 孵育时切片是否放置水平，否则会导致抗体流失。
如果阴性对照没有反应，阳性对照反应良好，而标本弱阳性，则可能是由于阳性对照不是同一种组织、或固定方式不同等原因所致。

非特异性染色
    ① 是否有效地去除了内源性酶和生物素。应注意的是，并不是每一种组织均需要进行此步骤，但对于内源性酶或生物素丰富的组织，如肝脏、肾脏等，需考虑此原因。处理的方法为： 灭活碱性磷酸酶：最常用的方法是将左旋咪唑（24mg/m1）加入底物液中，并保持pH值在7.6~8.2，即能除去大部分内源性碱性磷酸酶，对于仍能干扰染色的酸性磷酸酶，可用50mmol/L的酒石酸抑制。
饱和处理内源性生物素：消除内源性生物素的方法是事先滴加亲和素，以饱和内源性生物素，使之不再有剩余的结合位点。具体方法是在ABC法或SP法染色前将切片浸于25ug/ml亲和素溶液中处理15分钟，PBS清洗15分钟后即可染色。
    ② 是否选择使用了正确的封闭血清。电荷吸附所造成的非特异性背景染色消除方法是以二抗动物的非免疫血清，用PBS稀释为3%-10%溶液孵育切片，以封闭吸附位点。有时其它无关蛋白，如牛血清白蛋白也常应用。另外，取材时避开出血、坏死区亦极重要。最近有些国内的实验室应用5%脱脂奶粉替代血清进行抗原封闭，效果也不错。
    ③ 所选择的抗体是否符合试验要求。因抗原不纯、标本片中含有与靶抗原相似的抗原决定簇等原因造成的非特异性染色只能通过采用高纯度、高效价的抗体、或针对更具特异性抗原决定簇的单克隆抗体来解决。
    ④ 一抗的使用浓度是否过高。
    ⑤ 清洗是否充分。应严格操作规程。因在缓冲液中含有一定量的盐，这亦有利于减低背景着色，通常0.05mol/l Tris—HCl，0.15mol/l NaCl已适用于多数染色方法，溶液内加入吐温20，效果更佳。特殊标记时，试剂公司一般都提供缓冲液的配方。
    ⑥ DBA的使用是否正确。DAB的孵育时间和配制方式可以产生某些背景颜色，使用浓缩型DAB试剂盒时，请严格按照说明书标明的滴加顺序操作，注意校正蒸馏水的pH值，以确保实验结果的正确性；粉剂DAB溶解时，常有一些不溶性颗粒，这些颗粒须经过滤除去，否则可能沉积于切片组织上，产生斑点状着色。另外，DAB保存不妥产生氧化物亦可沉积于切片上，因此需将DAB保存于避光干燥处，现用现配，临用前加H2O2。孵育时间过长也会造成背景染色。
    ⑦ 标本染色过程中是否曾经干涸，否则会造成边缘部的非特异性染色。
    ⑧ 检查二抗与标本的内源性组织蛋白是否有交叉反应。

1、染色过强
原因－－－解决办法
A、抗体的浓度过高或抗体孵育时间过长－－－降低抗体滴度（一般指浓缩性抗体）抗体孵育时间：室温1小时或4℃过夜 
B、孵育温度过高，孵育温度超过37℃－－－ 一般室温20-28℃ 
C、DAB显色时间过长或DAB浓度过高 －－－显色时间不能超过5-10分钟，以显微镜下观察为准

2、非特异性背景染色 
原因－－－解决办法
A、操作过程中冲洗不充分－－－每步冲洗3×5 
B、组织中含过氧化物酶未阻断－－－可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长 
C、组织中含内源性生物素－－－正常非免疫动物血清再封闭 
D、血清蛋白封闭不充分－－－ 延长血清蛋白封闭时间 

3、染色弱 
原因－－－解决办法
A、抗体浓度过低，孵育时间过短－－－提高抗体浓度，孵育时间不能少于60分钟
B、试剂超过有效使用期－－－及时更换试剂
C、操作中，滴加试剂时缓冲液未沥干，致使试剂稀释－－－每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液（但防止切片干燥）
D、室温太低，低于15℃－－－若室温低于15度，要改放在37℃孵育箱孵育30-60分钟（或4℃冰箱过夜）
E、蛋白封闭过度－－－封闭时间不要超过10分钟

4、染色阴性
原因－－－解决办法 
A、操作步骤错误－－－重新试验，设立阳性对照 
B、组织中无抗原－－－设立阳性对照片，以验证实验结果 
C、一抗与二抗种属连接错误－－－仔细确定一抗与二抗种属无误 

来源：生命经纬

疫组织化学问题解答
免疫组织化学是一种什么方法？

免疫组织化学方法是一种把分子水平的物质准确具体表达出来的一种方法，这些分子水平的物质可能与癌细胞，细菌，病毒等等有关。自从成功地制作出这些特异性的抗体，使组织结构可以从分子水平中显示出来，这些特异性抗体可以与肿瘤细胞中特定的结构结合，这些抗体被称为单克隆抗体。把这些单克隆抗体孵育在组织切片上，与特定的靶细胞进行特异的反应。如单克隆抗体可以与癌细胞发生特异性反应，单克隆抗体可以从特定的肿瘤病人血细胞中获得。在组织切片中结合的抗体可以用棕色或红色显示出来。比如，对转移到骨组织中的肿瘤细胞进行标记实验，我们可以用前列腺特异性抗体进行标记，如显示出棕色或红色的阳性反应，我们可以明确地判断这个转移性肿瘤来自前列腺癌，有些转移的肿瘤距原发部位可能更远。免疫组织化学不仅能帮助准确地诊断出肿瘤的性质，还可以预测肿瘤预后的生物学行为。例如，我们可以知道所有组织细胞的增殖活性。这不是更有意义的实验吗？我们能够判定在一种肿瘤组织中，80%的细胞增殖抑制了其他10%的肿瘤细胞的增殖，我们可以判定出这种肿瘤细胞增殖率高，要比其他肿瘤生长迅速，进展快。

在其他方面，免疫组织化学染色可以指导某些肿瘤的化疗，如：可以测定女性乳腺癌细胞中携带雌激素受体的含量。如果癌细胞中雌激素表达阳性，病人可以进行三苯氧胺的治疗，雌激素能够促进乳腺癌细胞的生长，三苯氧胺有封闭癌细胞中雌激素受体的功能。在此过程中，携带雌激素受体的癌细胞是通过激素促进它生长的，而且，癌细胞增生可以通过三苯氧胺治疗来阻止其生长的。因此，免疫组织化学测定雌激素受体的表达情况，可以预测三苯氧胺治疗的意义。这仅仅是免疫组织化学应用中的一个小例子。免疫组织化学在确定组织起源中的应用前景是无限的。免疫组化技术是一个复杂的生物技术，对每一个抗体标记物都有独自特定的染色方法，目的是能够明确各种组织起源，判定组织中是否存在特异抗原。

病理医生是如何对癌症做出诊断的?

癌症病人就诊时，外科医生会在肿瘤部位取一小块组织，送给病理科医生。在病理科，送检的组织经过石蜡包埋，制作成非常薄的组织切片，切片再进行HE染色，然后病理科医生将切片放在显微镜下观察，观察送检的标本中有没有肿瘤细胞，并做出诊断是患何种肿瘤。不幸的是，许多肿瘤组织细胞在显微镜下看起来非常相似，以致于病理医生难以完全准确地判断出肿瘤的性质。在许多肿瘤病例中，鉴别诊断是非常困难的，因为只有明确了肿瘤的性质，医生才能针对每种肿瘤制定出最有效的治疗方案，目前已经从分子水平研究出肿瘤细胞的表面和细胞内有特异性的物质表达。过去在传统的光学显微镜下及电镜下所看到的组织切片中的结构，曾经幻想的分子水平的结构，已经有现代免疫组织化学技术证明，这个技术的整个过程就叫做免疫组织化学方法。

CD抗原

CD，即分化丛（clusters of differentiation）。第Ⅳ届国际免疫学会议命名委员会（1983，京都），根据T细胞表面的分化抗原存在丛集现象，将这种抗原命名为CD抗原。CD抗原不仅存在于T细胞，也存在于B细胞，巨噬细胞等。　

交叉反应

指抗体除与其相应的抗原发生特异性反应外还与其它抗原发生反应。产生的原因有以下几个方面：

1． 抗原特异性。指用于免疫动物的抗原性物质中含有多种抗原分子，它引起动物产生针对多种抗原分子特异性的相应抗体。任何其它物质只要含有一种或多种与上述物质相同的抗原分子，必将与上述多特异性的抗血清发生交叉反应。

2． 共同决定簇。即两种抗原分子中都含有相同的抗原决定簇。

3． 决定簇相似，两种不同的抗原决定簇，如果结构大致相同，由于空间构象关系，某一决定簇的相应抗体可以与大致相同的决定簇发生交叉反应。当然抗原一抗体之间构象相似时的结合力小于吻合时的结合力。

　

抗原决定簇。它是指在抗原分子上为免疫系统识别和作用的基团，是抗原的关键结构。抗原决定簇的种类有1016?/FONT>1018种之多。决定簇的数目称为决定簇的价数，较大的分子决定簇较多，如红细胞上的A或B血型抗原，其决定簇数目可能超过100万。
多抗和单抗特性比较
均一性。一种单抗中，每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同，只有一种Ig亚类。即单抗是一种纯度很高的均一抗体。而从不同动物，不同时期所得到的多抗，各有不同的化学组成。多抗是多种种类和亚类Ig的混合物。
稳定性。单抗的稳定较差，对PH变化敏感，对热不稳定，提纯过程中易变性，而多抗的稳定性则较好。
特异性。单抗是单一地针对抗原的某一决定簇，所以用它进行血清学反应时，特异性强，敏感性高，一般不发生交叉反应。而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合，所以特异性较差，较易引起交叉反应。
重复性。单抗的重复性好，而多抗每批都不一样。
　

沉淀反应

多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀，而单抗只与抗原结合产生二聚体，不能直接形成抗原抗体沉淀物。

抗体的保存

抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如储存的抗体中蛋白浓度很低（10-100Mg/L），就应另加隔离蛋白以减少容器对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。

绝大多数已稀释的抗体应存在4℃-8℃条件下，以免冻融对抗体蛋白产生有害效应。抗体原液和已分离的免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件下，并避免反复冻融。冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温快速解冻。

被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，应将污染的抗体溶液及其他试剂弃之。为防止细菌污染，可于抗体溶液中加入0.01%叠氮钠。抗体经真空冷冻干燥后置-20℃以下可保存3-5年。

保存稀释后的单抗应加入0.1%叠氮钠浓度。大多数稀释抗体可进行冷冻保存，少数抗体可能会丢失抗原活性。大多数单抗，只要蛋白浓度适当，可在4℃下保存数月。

病理科成立免疫组化室需要哪些小设备（仪器）

1． 冰箱（4℃、-18℃）：贮存免疫试剂用。

2． 18cm不锈钢高压锅+电炉或家用微波炉。（抗原修复用）

3． 孵育盒（有机材料）；不锈钢或塑料耐高温切片架。

4． 冲洗瓶两个，定时器一个，10ml玻璃试管五个，塑料试管架。

5． 1000ul国产移液器两支，200ul进口移液器一支，20ul进口移液器一支，相应吸嘴。

6． 磨砂玻片。

7.  PAP油笔。
　

如何应用免疫组化进行病理科研设计？

科研课题的基本要求至少有四个，即创新性、科学性、可行性和推广应用性。关于创新性的重要性很好理解，谁喜欢东施效颦、拾人牙慧、人云亦云的文章？谁不想标新立异，“国内外尚无类似报道”？可对于病理科医生尤其是基层病理科医生，采用免疫组化技术进行创新性的科研，似乎免为其难。其实如果调整一下思维角度，难者也就不难了。我们在这里甘冒才疏学浅之嫌，介绍几种简单可行的创新性方法，以请教于病理界同仁。

方法之一，采用新抗体，这是最简单的办法。如金属蛋白酶MMP-9抗体是一种新抗体，其抗原MMP-9与肿瘤侵袭和转移有密切关系，但采用此抗体和免疫组化研究肿瘤侵袭、转移的文章国外少见，国内尚无，读者不妨一试。

方法之二，旧抗体新用途。比如关于凋亡及其相关因子表达与肿瘤发生发展的关系的研究，国内外有大量报道，而关于其非肿瘤疾病的关系的研究，却报道很少，有的甚至迄今未见报道。如果你将P53、bcl-2、c-myc、Bax、ICE等凋亡相关基因蛋白抗体用于非肿瘤性疾病研究，一定会获得新发现。再比如，P-糖蛋白抗体绝大多数用于肿瘤耐药性研究，却极少用于非肿瘤性疾病的研究。正常肝、肠道、肾等均表达P-糖蛋白，在非肿瘤性疾病时这种表达有什么改变，这种改变又有什么意义，迄今尚未了解，读者也不妨在这方面施展你的身手。

方法之三，同时应用多种抗体进行普通免疫染色或双重免疫染色研究二种或二种以上抗原的协同表达，只要这几种抗体选用合理，也比较容易获得新发现。

评价某种免疫学试验质量的指标

1． 诊断敏感性。指患者中因此试验得到阳性结果的百分率。计算方法：TP/（TP+FN）χ100%。理想试验的诊断敏感性为100%。

2． 诊断特异性。指正常人与无关疾病的患者中因此试验得到阴性结果的百分率。非患者的阴性结果为真阴性，其阳性结果为假阳性。计算方法：TN/（TN+FP）χ100%。理想试验的诊断特异性应为100%。

3． 诊断指数。为评价某种试验敏感性与特异性的综合指标。理想的指数应为200%，≤100%的试验不能成立。

4． 诊断效率。某种试验能准确区分患者和非患者的能力。计算方法：（TP+TN）/（TP+FP+TN+FN）×100%。理想试验的诊断效率应为100%。

5． 阳性预测值。指在所有阳性结果的人中，非患者的百分率，计算方法：TP/（TP+FP）×100%。理想试验的阳性预测值应为100%。

6． 阴性预测值。指在所有阴性结果的人中，非患者的百分率，计算方法：TN/（TN+FN）×100%。理想试验的阴性预测值应为100%。

免疫组化基础知识 

免疫组织化学的概念：
免疫组化是利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质)，对其进行定位、定性及定量的研究，称为免疫组织化学。

免疫组化实验所用的抗体有哪些？
免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。

免疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些？
实验所用主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。
其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。

石蜡切片为什么要做抗原修复？有哪些方法？
石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行IHC染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。
常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等，常用的修复液是pH6.0的0.01 mol/L的柠檬酸盐缓冲液。

免疫组化常用的染色方法有哪些？
根据标记物的不同分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素——抗生物素染色法最常用。

抗体交叉反应的原因：
指抗体除与其相应的抗原发生特异性反应外还与其它抗原发生反应。产生的原因有以下几个方面：
1. 抗原特异性指用于免疫动物的抗原性物质中含有多种抗原分子，它引起动物产生针对多种抗原分子特异性的相应抗体。任何其它物质只要含有一种或多种与上述物质相同的抗原分子，必将与上述多特异性的抗血清发生交叉反应。
2. 共同决定簇即两种抗原分子中都含有相同的抗原决定簇。
3. 决定簇相似，两种不同的抗原决定簇，如果结构大致相同，由于空间构象关系，某一决定簇的相应抗体可以与大致相同的决定簇发生交叉反应。当然抗原一抗体之间构象相似时的结合力小于吻合时的结合力。

多抗和单抗特性比较：
1.均一性。一种单抗中，每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同，只有一种Ig亚类。即单抗是一种纯度很高的均一抗体。而从不同动物，不同时期所得到的多抗，各有不同的化学组成。多抗是多种种类和亚类Ig的混合物。
2. 稳定性。单抗的稳定较差，对PH变化敏感，对热不稳定，提纯过程中易变性，而多抗的稳定性则较好。
3. 特异性。单抗是单一地针对抗原的某一决定簇，所以用它进行血清学反应时，特异性强，敏感性高，一般不发生交叉反应。而多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合，所以特异性较差，较易引起交叉反应。
4.重复性。单抗的重复性好，而多抗每批都不一样。
5. 沉淀反应。多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀，而单抗只与抗原结合产生二聚体，不能直接形成抗原抗体沉淀物。

抗体的保存：
抗体储存容器应由不吸附蛋白质的材料制成，常用的有聚丙烯，聚碳酸酯和硼硅酸玻璃。如储存的抗体中蛋白浓度很低（10-100mg/L），就应另加隔离蛋白以减少容器对抗体蛋白的吸附，隔离蛋白常用0.1%-1.0%的牛血清白蛋白。绝大多数已稀释的抗体应存在4℃-8℃条件下，以免冻融对抗体蛋白产生有害效应。抗体原液和已分离的免疫球蛋白组分应保存于-20℃条件下，并避免反复冻融。冷冻的抗体溶液应置于室温中缓慢地解冻，应绝对避免用高温快速解冻。被细菌污染的抗体常会出现假阳性结果，应将污染的抗体溶液及其他试剂弃之。为防止细菌污染，可于抗体溶液中加入0.01%叠氮钠。抗体经真空冷冻干燥后置-20℃以下可保存3-5年。保存稀释后的单抗应加入0.1%叠氮钠浓度。大多数稀释抗体可进行冷冻保存，少数抗体可能会丢失抗原活性。大多数单抗，只要蛋白浓度适当，可在4℃下保存数月。

免疫组织化学

免疫组织化学（Immunohistochemistry）或称免疫细胞化学，是指利用抗原与抗体特异性结合的原理，通过特异的抗原、抗体反应标记上可见的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素等)，来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成分的方法。此方法可以识别定位各种细胞组织成分，包括蛋白质、多肽、核酸、部分类酯、多糖、激素、病原体（寄生虫、细菌病毒）、受体、神经介质、肿瘤的标记物（抗原或相关抗原）等，一般认为凡具有抗原性或半抗原性物质都可以用免疫细胞化学方法检查并显示出来。在光学显微镜、荧光显微镜或电子显微镜下观察其性质定位，还可以利用细胞分光光度计、图像分析仪、共聚焦显微镜等进行细胞原位定量测定。免疫组织化学技术具有特异性强、灵敏度高、定位准确和简便快速等优点，又能够有机地同形态、功能及代谢的研究结合起来，用以研究其它技术（如化学、生化、免疫及生理等）难以深入的领域。免疫细胞化学对生物医学基础研究、预防和临床医学的研究、军事医学的应用研究都具有重要价值。
      免疫组化实验中常用的抗体分为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体，应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后，从动物血中所获得的免疫血清，是多个B淋巴细胞克隆所产生的抗体混合物。多抗和单抗特性比较如下：①均一性：一种单抗中，每个抗体的化学结构和氨基酸顺序都相同，只有一种Ig亚类，即单抗是一种纯度很高的均一抗体；而从不同动物，不同时期所得到的多抗，各有不同的化学组成，多抗是多种种类和亚类Ig的混合物。②稳定性：单抗的稳定较差，对pH变化敏感，对热不稳定，提纯过程中易变性；而多抗的稳定性则较好。③特异性：单抗是单一地针对抗原的某一决定簇，所以用它进行血清学反应时，特异性强，敏感性高，一般不发生交叉反应；多抗能与抗原上的多种抗原决定簇结合，所以特异性较差，较易引起交叉反应。④重复性：单抗的重复性好；多抗每批都不一样。⑤沉淀反应：多抗由于与抗原多价结合容易形成网络样沉淀；而单抗只与抗原结合产生二聚体，不能直接形成抗原抗体沉淀物。
        免疫组化实验所用的标本也分两大类：包括组织标本和细胞标本，前者包括石蜡切片（病理大片和组织芯片）和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。其中石蜡切片是制作组织标本最常用、最基本的方法，对于组织形态保存好，且能作连续切片，有利于各种染色对照观察；还能长期存档，供回顾性研究；石蜡切片制作过程对组织内抗原暴露有一定的影响，但可进行抗原修复，是免疫组化中首选的组织标本制作方法。石蜡切片标本均用甲醛固定，使得细胞内抗原形成醛键、羧甲键，封闭了部分抗原决定簇，同时蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。所以要求在进行染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。常用的抗原修复方法有微波修复法，高压加热法，酶消化法，水煮加热法等。根据标记物的不同，免疫组化常用的染色方法分为免疫荧光法，免疫酶标法，亲和组织化学法，后者是以一种物质对某种组织成分具有高度亲合力为基础的检测方法。这种方法敏感性更高，有利于微量抗原(抗体)在细胞或亚细胞水平的定位，其中生物素-抗生物素染色法最常用。
        运用免疫组化进行病理科研设计时，可以采用如下方法：①采用新抗体；②开发旧抗体的新用途；③同时应用多种抗体进行普通免疫染色或双重免疫染色研究二种或二种以上抗原的协同表达，只要抗体选用合理，也能容易获得新发现。

首先很感谢网友的回复，谢谢
但是太杂乱了，是直接从http://www.bbioo.com/bio101/immunology/et/200511/5053.html
拷来的
有没有系统点的啊
比如作好的pdf文档啊

去问问老师呀,你们老师不告诉你吗?
要是实在不懂,打电话给我老师吧:010-66930231  找霍老师.
别太打扰她啊.实在搞不清楚再问问

我是医科的
现在的老师只会作手术，这些基本的也不是很清楚了
怎么问？
算了
月底我就结贴，不管有么有答案