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主题：【讨论】如何用液相检测蛋白质目标纯度

浏览0 回复8 电梯直达
yuan_log
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发表于：2009/01/05 14:12:49 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
RT。
我这边是做重组疫苗的，基本都是蛋白质。需要用液相通过面积归一检测原液的目标蛋白纯度，现在的问题是，我们如何保证在一个洗脱条件下样品中的杂质蛋白统统都出来了呢？
请教各位斑竹板油的看法和经验
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emoc98311
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2009/1/5 14:57:59 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
保证在一个洗脱条件下样品中的杂质蛋白统统都出来,就必须要设置一个好的梯度条件，跟实际样品有关，自己实验下就知道了
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yuan_log
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2009/1/5 15:09:32 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 emoc98311 发表:
保证在一个洗脱条件下样品中的杂质蛋白统统都出来,就必须要设置一个好的梯度条件，跟实际样品有关，自己实验下就知道了

问题是我根本不知道样品中有那些杂质，更不知道含有多少。那么即便我用乙腈从0％洗到100％，恐怕也不能说都吸出来了吧
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It is me!
hmzhou83
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2009/1/5 15:52:05 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
原文由 yuan_log 发表:
问题是我根本不知道样品中有那些杂质，更不知道含有多少。那么即便我用乙腈从0％洗到100％，恐怕也不能说都吸出来了吧



基本上100％就认为全部出来了。
再说了，你在进行纯度鉴定之前肯定已经经过其他的纯化步骤，肯定已经比较纯了，杂质都比较清楚了。
选择一个条件后，基本上是可以确定的。
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〓猪哥哥〓
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2009/1/5 20:15:05 地毯 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
乙腈梯度增加到100%，都出来了，你也可以走最后峰保留时间的2倍时间，观察是否还有峰出现，当然此时有机相的比例应该比较大
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colindrj
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2009/1/6 22:30:00 地板 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
里面要加三氟乙酸
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yuan_log
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2009/1/13 10:08:20 6楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
自己顶
RT，不知道各位老大有没有用液相做蛋白浓度的
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klicking
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2014/10/13 8:25:11 7楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
请问一下  HPLC检测蛋白质 一般用什么柱子？
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cxf1027
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2016/12/30 11:21:38 8楼 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
同问 请教各位大侠
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