原文由 wangbaoqiu(wangbaoqiu) 发表:
1保护柱与色谱柱之间出现了死体积,导致色谱峰分叉,但同样的情况在测定浓度较低的样品室,分叉现象却不明显甚至无分叉现象的发生,请问其中的原因.
2为何 正相色谱中,样品溶液的溶剂与了流动相略有偏差时就会产生峰展宽现象(柱效严重下降),而反相色谱却很少发生?峰展宽现象.只有当溶剂是甲醇或乙醇是才偶尔发生,为什么?
1)一般来说死体积增加不会引起分叉。
2)进样浓度不同引起分叉程度表现程度不同的现象,说明造成分叉的原因是在柱头,有两种可能:第一是保护住填料与分析柱填料不一致前者保留能力更强但容量有限,可以使一部分样品成分滞后;第二保护柱或柱头被部分堵塞,组分不能以塞状同时前进,而是被迫从孔道穿过。
3)样品溶液对色谱峰展宽的作用无论正反相色谱都会发生。
这种现象的本质是,在色谱柱中样品溶液对组分的溶解洗脱能力远比流动相的能力更强。例如在反相色谱分离时,如果选用的初始流动相为10%甲醇(梯度洗脱),而样品溶液是80%的甲醇,对于一种极性较强的组分(保留时间较短),很可能就会产生峰变宽的影响,而在同样的条件下,对极性较弱的成分也许峰宽变化并不明显,因为80%甲醇与适宜它洗脱的流动相相比差异并不大。在正相分离时则正好相反,峰展宽的现象在弱极性成分中更易出现。