“yukepotato”朋友提出用溶剂峰来测试是个好办法,当然也可以选择不保留化合物进行测试,比如使用C18柱时采用尿嘧啶进行测试。
色谱柱的死体积=柱床体积-填料体积=填料间隙体积+填料孔隙体积
柱床体积很好算,如下:
V=π×d2×L/4
π为圆周率,使用3.14即可;L为柱长,单位为cm;d为色谱柱内径,单位为cm;V为柱床体积体积,单位为mL。
比如250*4.6 mm,5 微米的柱子,柱床体积为4.15 mL。但死体积要明显小于次值,我的测试结果是,在250*4.6 mm,5 微米,100 埃的柱子上,尿嘧啶的洗脱体积为2.05 mL,所以该规格色谱柱的死体积约等于或略小于2.05 mL。
只要填料均为100 埃的全多孔硅胶,其他规格的色谱柱可以参考本人的测试结果。