主题：【第九届原创】HPLC-RID测定乳糖含量及有关物质

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发表于：2016/09/30 23:12:09 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

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HPLC-RID法测定乳糖含量和有关物质

前言：乳糖是我们制药领域，最常用的辅料之一，我们药用乳糖对其含量和杂质的限量有极其严格的要求。以下就是我们使用《中国药典》2015年版四部标准方法，对购入的一批药用乳糖的含量和有关物质进行分析的过程，与大家一起分享，希望各位老师多多指导。

一、【含量测定】
仪器型号电子分析天平：赛多利斯 BT125D型十万分之一电子分析天平液相色谱仪：Agilent 1260 四元梯度液相色谱仪
色谱条件：色谱柱：氨基柱（上海月旭拓扑 250*4.6）检测器：示差折光检测器检测器温度:40℃
流速:1.0ml/min 柱温： 45 ℃ 流动相: 乙腈-水（70 ：30 ）进样量: 10μl
对照品乳糖、蔗糖对照品使用来源：中国食品药品检定研究院
系统适用性试验：精密称取乳糖对照品10.15mg、蔗糖对照品10.21mg，置10ml容量瓶内，用水稀释至刻度摇匀。乳糖峰与蔗糖峰的分离度应大于1.5，理论塔板数以乳糖峰计不得低于5000。
对照品溶液的制备: 精密称取乳糖对照品两份分别为10.10、10.08mg置10ml容量瓶内，用水稀释至刻度摇匀，即得。
供试品溶液的制备:取本品适量，精密称定，两份分别为10.05、10.03mg,置10ml量量瓶内，用水稀释至刻度摇匀，即得。
检测结果:

系统适应性试验: 乳糖、蔗糖分离度均大于1.5，乳糖理论塔板数大于5000

乳糖对照品色谱图

乳糖供试品色谱图

通过外标法计算本批按无水物计算含量为98.9%，在药典规定的98.0%至102.0之间，符合标准规定。

二、【有关物质】
色谱条件同含量测定项下方法测定

供试品溶液的配制：取本品，精密称定 1.0023g,置10ml量瓶中，用适量水使溶解，并稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。
对照品溶液的配制：精密量取供试品溶液1ml,置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，过滤，即得。
有关物质供试品色谱图如下：

通过计算个杂质峰面积之和小于对照峰面积的0.5倍，小于0.5%。
总结：HPLC-RID测定乳糖含量和有关物质，样品处理简单，要注意的是RID平衡很关键，保证检测器外部环境的稳定很受到重要。
RID为通用型检测器，容易受到气体流动和温湿度的影响。另外色谱柱的选择也很重要，一般的柱子乳糖理论踏板数上5000很容易，
上海月旭拓扑氨基柱优越的性能为检测节省很多宝贵的工作时间。