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MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中的表达及 MSI1 低表达细胞模型的构建MSI1 在人小细胞肺癌细胞系中高表达
提取人正常肺上皮细胞 BEAS-2B,SCLC-A 型 H69、H209、DMS153 细胞,SCLC-N 型 H446、H82、H2066 细胞,SCLC-P 型 H526、H211 细胞,SCLC-Y 型 H841、DMS114、
SW1271 细胞的 RNA,利用 q-
PCR 检测 MSI1 在正常肺上皮及小细胞肺癌细胞系中的表达情况,结果如图 2-1 显示,MSI1 在小细胞肺癌细胞系中的表达远远高于正常肺上皮细胞,综合分析,选取了 H69、H82、H526 及 SW1271 细胞用于后续实验。
图 小细胞肺癌细胞系中 MSI1 mRNA 的表达(***P<0.001)
MSI1 低表达细胞模型的构建
本实验选取人小细胞肺癌细胞系 H69、H82、H526、SW1271 细胞,使用慢病毒感染技术敲低 MSI1 的表达,同时设置对照组除外病毒本身对细胞产生的影响,待细胞状态良好使用嘌呤霉素筛选, 然后在荧光显微镜下观察如图 , 可见 H69-NC 、H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、H82-NC、H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2
细胞均产生绿色荧光,表明人小细胞肺癌细胞慢病毒感染成功。
图 慢病毒感染后 4X 荧光显微镜下图片(H69、H82、H526、SW1271 明场及荧光照片)
敲低 MSI1 后转录和蛋白水平验证
分别提取对数生长期的 H69-NC 、H69-shMSI1-1 、H69-shMSI1-2 、H82-NC 、
H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-NC、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-NC、
SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 细胞的 RNA 和蛋白,利用 q-
PCR 技术分别检测各细胞 MSI1 mRNA 相对表达量,结果如图 所示,与对照组相比,H69-shMSI1-1、 H69-shMSI1-2 、 H82-shMSI1-1 、 H82-shMSI1-2 、 H526-shMSI1-1 、 H526-shMSI1-2 、
SW1271-shMSI1-1、SW1271-shMSI1-2 组 MSI1 mRNA 表达量明显降低(P<0.01), 抑制率约为 75%。利用 Western blot 技术检测各细胞内 MSI1 蛋白的表达情况。结果如图 2-3 所示,与对照组相比,MSI1 蛋白表达在 H69-shMSI1-1、H69-shMSI1-2、
H82-shMSI1-1、H82-shMSI1-2、H526-shMSI1-1、H526-shMSI1-2、SW1271-shMSI1-1、
SW1271-shMSI1-2 细胞中明显降低。表明 MSI1 低表达细胞模型构建成功。
图 敲低 MSI1 在转录水平和蛋白水平的验证(***P<0.001)