主题:【求助】液相色谱多肽样品的制备

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yishengweiyao
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原文由 fff75(fff75) 发表:
原文由 yishengweiyao(yishengweiyao) 发表:
各位大侠,小弟遇到一问题。我在分离多肽样品时,用的制备柱。发现样品在柱子里扩散很严重。纯度越来越低。恳求解决方法。我用的是c18反向,流动相是乙腈和纯水。

1. 购买的柱子还是自己填的柱子,几英寸的?貌似你柱子的柱效低;
2. 你使用乙腈和纯水做流动相,不加缓冲吗?一般多肽的纯化都会加一定的缓冲盐;
3. 你的纯化条件够不够好?出峰是不是晚了?纯化不要太注重分离度,除非你要求纯度很高。

首先表示感谢。柱子自己填的,2.5的。柱效测的很好。流动相都是调成酸性的,因为没有经验,也不知道用什么样的缓冲盐号。样品的等电点貌似有点低,3点多。出峰时间正好,纯化条件也试过是最好的了。
有水有渝
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柱效很好与扩散严重有点矛盾,你用什么测的柱效?
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