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透射电镜（TEM）
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主题：【求助】外行人员实验需要用到透射电镜，有太大不懂的地方

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发表于：2010/11/17 22:42:24 楼主 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
1、透射电镜电镜观察内膜组织的细胞器，它的组织要求有多大？切片要切多少张，还是只能切一张？
2、TEM 观察到的细胞器如线粒体、高尔基体等，除了描述其结构外，有没有办法做统计分析的呢，可以怎样统计呢？
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2010/12/24 9:22:45 沙发 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
是自己做还是请老师做？做生物电镜的老师对这个肯定门儿清啊。
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2011/1/10 20:16:58 板凳 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
透射电镜生物样品制备步骤

一．取材：
组织块小于1立方毫米
二．固定：       
2.5%戊二醛，磷酸缓冲液配制固定2小时或更长时间。
用0.1M磷酸漂洗液漂洗        15分 三次
1%锇酸固定液固定                2-3小时
用0.1M磷酸漂洗液漂洗        15分 三次
三．脱水：       
50%乙醇                        15-20分
70%乙醇                        15-20分
90%乙醇                        15-20分
90%乙醇 90%丙酮（1：1）        15-20分
90%丙酮                        15-20分
以上在4度冰箱内进行
100%丙酮          室温                15-20分三次
四．包埋：       
纯丙酮+包埋液（2：1）室温 3-4小时
纯丙酮+包埋液（1：2）室温 过夜
纯包埋液                  37度 2-3小时
五．固化：       
37度烘箱内                过夜
45度烘箱内                12小时
60度烘箱内                24小时
六．超薄切片机切片 50-60 nm
七．3%醋酸铀-枸橼酸铅双染色
八．透射电镜观察。拍片
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zhouzb
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2011/1/14 12:58:05 马扎 管理 分享 倒序浏览 只看楼主 回复 私聊
实验室装修，加之工作忙，好久没来坛子里晃了，惭愧。
1，理想标本大小1立方毫米，参考值。切片一般我们捞两个铜网，每个铜网上3-4张切片。
2，可以做统计分析，要求照相时统一放大倍数，尽可能多的视野，然后用分析软件统计。

11月的求助，只怕已经做了吧？
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