主题：【分享】高效液相色谱基础篇|关于色谱柱活化的小知识原创紫川Vern 磊哥研学社 2024年10月08日 06:48 福建

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发表于：2024/10/14 10:52:12 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

今天讲一讲有关色谱柱活化的过程，我们常常拿到一个新的色谱柱，想都不想的就直接检测，往往在开始用的前面几针会出现一些神奇的东西，这大多数是没有将色谱柱活化好或者平衡好。

01.活化的目的

1）去除保存液：色谱柱在出厂时通常都会用特定的溶剂（如甲醇、乙腈等）保存。活化过程中，这些保存液需要被去除，因为它们可能会干扰后续的色谱分析。
2）去除杂质：在色谱柱的生产、运输或储存过程中，可能会有杂质吸附在柱内。活化有助于清除这些杂质，确保分析结果的准确性。
3）稳定柱性能：通过活化，可以使色谱柱的填料重新分布均匀，从而保证色谱柱的性能稳定，提高分离效率。
4）平衡柱床：活化有助于使色谱柱内部的填料达到适当的溶剂平衡状态，减少柱床的压缩，提高柱效。
5）提高重现性：通过活化，可以确保色谱柱在不同的分析批次中提供一致的性能，从而提高分析结果的重现性。

02.活化的方法

1）溶剂冲洗法：使用强极性溶剂（如甲醇或乙腈）冲洗色谱柱，以去除残留的保存液和杂质。也可以使用梯度洗脱的方式，逐渐增加有机溶剂的比例，直至与分析所用流动相一致。
2）流动相平衡法：在使用新色谱柱或更换色谱柱后，用实际分析所用的流动相平衡色谱柱，确保柱性能稳定。
3）样品平衡法：在使用新色谱柱或更换色谱柱后，用实际分析所用的样品平衡色谱柱，确保色谱柱在分析样品之前已经达到了适当的平衡状态，特别是当分析的化合物与色谱柱的固定相有较强的相互作用时。

03.活化的步骤（参考）

1）准备阶段：确认色谱柱的类型和规格，了解色谱柱的保存液、pH稳定性范围和最高耐压。准备所需的溶剂，如甲醇、乙腈等。
2）润湿色谱柱：将色谱柱安装到HPLC系统上，确保流向箭头正确。用色谱柱保存液冲洗色谱柱，以避免直接用有机溶剂导致柱填料干枯。
3）溶剂冲洗：使用与色谱柱保存液相容的强极性溶剂（如甲醇或乙腈）以低流速冲洗色谱柱，然后逐渐提高流速。
4）流动相平衡：使用实际分析所用的流动相通过色谱柱，直到压力和基线稳定。
5）柱效测试：进行柱效测试，以确保色谱柱活化后的性能。（一般柱效在前面的活化过程中，柱效测试基本都可以达到要求，但我还是建议你用样品再平衡几针）
6）样品平衡：采用样品平衡法，使用样品或含有类似化合物的溶液通过色谱柱，以预先占据柱中的活性位点。
7）保存：活化后，如果色谱柱暂时不使用，需要将其保存在合适的溶剂中，通常是高比例的有机相，如甲醇或乙腈。
8）记录：记录活化过程中的所有参数，包括溶剂类型、流速、体积和时间，以备后续参考。

04.活化的注意事项

1）仔细阅读说明书：在活化之前，仔细阅读色谱柱的使用说明书，了解制造商推荐的活化方法和溶剂。
2）正确安装色谱柱：确保色谱柱正确安装在液相色谱系统中，流向箭头与流动相流向一致。
3）避免干柱：防止色谱柱干燥，因为干燥可能导致填料结构变化，影响柱性能。
4）使用兼容溶剂：使用与色谱柱兼容的溶剂进行活化，避免使用会引起柱填料破坏的溶剂。
5）控制流速：在活化过程中，逐渐增加流速，避免一开始就使用高速，这可能会对柱床造成冲击。
6）充分平衡：确保色谱柱在开始样品分析前已经充分平衡，以保证重现性和稳定性。
7）活化后检查：活化后，通过运行测试样品来检查色谱柱的性能，确保活化效果。

总结一下：活化色谱柱是确保分析结果准确性的重要步骤。简单来说，就是通过一系列溶剂冲洗和样品平衡，去除色谱柱内的保存液和杂质，稳定柱性能，并确保每次分析时色谱柱都处于最佳状态。首先，我们要用保存液预湿新柱，然后用强极性溶剂如甲醇或乙腈进行冲洗，接着用实际分析所用的流动相或样品溶液进行平衡，直到色谱柱完全准备好进行分析。记得，在整个过程中要温柔对待色谱柱，避免高速冲洗和压力过大，最后别忘了在使用前后都要正确保存色谱柱。每一步都要记录详细，这样不仅有助于问题的排查，也能确保色谱柱的长期稳定使用。

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