主题：【分享】欧盟兽药检测方法（之三十三）

气质联用法检测动物肝脏中的左旋咪唑(EEC,Sg4.5,本法可扩展为确正方法)
the Determination Method of Residues of Levamisole
in Anamal Livers by GC-MS

安全操作注意事项
实验室操作人员在处理动物组织时，要戴一次性手套，所有操作包括溶解过程都必须在通风橱中进行。

引言
左旋咪唑是一种广谱杀虫剂，主要用于控制反刍类动物、马及猪的胃肠道、肺中的线虫。 1. 主题内容
本法可用于检测肝脏组织中的左旋咪唑残留量，也可做为常规的筛选法。同时本方法也易扩展为确正方法。

2. 应用范围 
本法适用于肝脏组织中左旋咪唑残留量的检测，其检测低限为5μg/kg肝脏。

3. 参考文献
—— 欧盟委员会93/256/EEC指令，制定检测内分泌器官的药残方法。
[OJ.NO.L.118,14.4.93 PP64-74］。
—— ISO78/2-1982标准集——第2部分：化学分析标准。
—— 气质联用法检测肝脏中的左旋咪唑 Neats,S.(1993)
标准操作方法 ACU 0267A,CVL.,UK
—— 气质联用法检测肝脏中的左旋咪唑 Porter,S.,Patel,ER.Neate,S.和Osso,P.(1993).
食品中的农药残留Ed.Haagsma,N,Ruoter,A & Czediik-Eysenberg,P.B.,
Veldhoven,NL.PP548-552 .

4. 定义
本检测方法所测得的左旋咪唑含量是指被测物质中左旋咪唑的残留量，不论其以何种化学形式存在，检测结果表示为μg/kg 。

5. 方法提要 
本方法包括4个步骤：
(1)将样品中加入碱和乙酸乙酯均质。
(2)用液-液分配净化。
(3)气质联用电子轰击模式测定。
(4)通过标准曲线采用内插法计算出左旋咪唑含量，并用左旋咪唑的回收率加以校正。

6. 化学试剂
6.1.1 三氯甲烷。 
6.1.2 乙酸乙酯。
6.1.3 氢氧化钾。
6.1.4 甲醇：色谱纯。
6.1.5 浓盐酸 。
6.1.6 无水颗粒状硫酸钠。 
6.1.7 乙酸乙酯 。
6.1.8 水：去离子并经0.2μm滤膜过滤。
6.2 溶剂
6.2.1 50%氢氧化钾溶液：将250克氢氧化钾溶解于400mL水中，冷却后定容至500mL。
6.2.2 0.5M盐酸溶液：将22mL浓盐酸加入400mL水中，冷却后定容至500mL。
6.3 标准品
6.3.1 左旋咪唑盐酸盐()
6.3.2 标准贮备液：将50mg左旋咪唑溶解于甲醇中，并稀释至50mL，当月配制。
6.3.3 标准工作液
6.3.3.1 将1ml贮备液加入到100mL三氯甲烷中，最终浓度为10μg/mL，当天配制。 6.3.3.2 分别取6.3.3.1溶液1mL,2mL,5mL加入到10mL三氯甲烷中，最终浓度分别为1，2和5μg/mL，其分别相当于农药残留限量的1、2和5倍，当天配制。
6.4 加样方法
取上述标准工作液(6.3.3.1和6.3.3.2)各1mL加入到5g样品中，静置15分钟。

7. 仪器和设备
7.1 离心管：50mL 材质：Sarsted聚丙烯，螺旋盖。
7.2 锥形离心管：12mL 材质：聚丙烯，带帽。
7.3 锥形离心管：10mL 材质：玻璃，塑料帽。
7.4 量筒：25mL,50mL,1L。
7.5 容量瓶：10mL,25mL,50mL,100mL,500mL。
7.6 移液管：1mL,2mL,5mL。
7.7 烧杯：100mL,250mL,500mL,1L。
7.8 乙酸纤维素滤膜：0.2 μm。
7.9 Pasteur吸管。
7.10 微量注射器：100μL 。
7.11 7.11 混合器(涡旋型)。
7.12 离心机—MSE Mistral 2L或相当者。
7.13 均质器。
7.14 振荡器：机械平板摇床(Denley)。
7.15 微量管：1.5mL有卷曲金属帽和塞。
7.16 Falcon 710S瓶盖(Becton Dickinson)
7.17 200μL微量管(Chromacol 型号02-CVTG)。
7.18 天平。
7.19 旋转蒸发器(氮)。
7.20 可调节型移液管：200μL,1000μL,5000μL。
7.21 GC-MS气-质谱联用仪。
质量选择检测器(质谱仪)与HP-5890气相色谱、HPVectra486/33uPC机联用。
GC-MC装有自动进样器(Henlett Packard 7673A)。
色谱柱：15m×0.25mm(内径)×0.25μm(膜厚),DB5毛细管柱。