原文由 iamyounger 发表:原文由 hgycook 发表:
1 .确定最佳分离状态时的流动相pH
2 .选择具有与流动相的pH相近的pKa 的缓冲液(即使浓度稀也具有较强能力的缓冲液)
3 .确认检测波长下缓冲液是否有大的吸收(在波长210nm附近进行检测时,不能用醋酸和 柠檬酸的缓冲液)
非常感谢您的帮忙,
1、就是难以确定最佳分离状态时的流动相ph,0.1mol/L的HAC是参照参考文献的
2、意思是选择与目标物PKa相近的PH缓冲液?
3、检测波长为280纳米,醋酸缓冲液在此波长下,不干扰检测
原文由 hgycook 发表:
如果PH定为4.5 选PKa为4.5的缓冲液
原文由 iamyounger 发表:
本人正在做3,4二羟基苯丙氨酸这个物质含量的测定,因其含有氨基和羧基,用甲醇:0.1mol/L的HAC(PH=2.86)做流动相,检测波长为280nm,其保留时间为2min(ODS C18柱),闲其保留时间比较短,担心杂质未完全分离。由于两性化合物PH影响很大,请教论坛高手,目标物3,4二羟基苯丙氨酸的流动相合适的缓冲液PH该如何定。附:网络上查得3,4二羟基苯丙氨酸pka值为 9.88, 2.36,8.68,11.68(其中2.36应该就是-COOH的pka值)
原文由 wenshaowei-2008 发表:原文由 iamyounger 发表:
本人正在做3,4二羟基苯丙氨酸这个物质含量的测定,因其含有氨基和羧基,用甲醇:0.1mol/L的HAC(PH=2.86)做流动相,检测波长为280nm,其保留时间为2min(ODS C18柱),闲其保留时间比较短,担心杂质未完全分离。由于两性化合物PH影响很大,请教论坛高手,目标物3,4二羟基苯丙氨酸的流动相合适的缓冲液PH该如何定。附:网络上查得3,4二羟基苯丙氨酸pka值为 9.88, 2.36,8.68,11.68(其中2.36应该就是-COOH的pka值)
你的样品极性太大了
使用反相系统,怎么调,保留时间都不会变化多少
建议使用正相色谱试试