主题：【第八届原创】蒲公英药材高效液相色谱法检测

蒲公英药材高效液相色谱法检测

        蒲公英大家应该都不陌生，它春天出土生长，很快开花结果。很多地方它都能生长，山间春林中，田野耕地上，道路旁，小河边，庭院中，沙滩上我们都常会看到它漂亮多瓣的小黄花，褶皱细长的小绿叶，毛茸茸随风飘扬的种子团。它为菊科植物，所以它开的小黄花很像菊花，很漂亮。它的果实为长椭圆形瘦果，上面长有白色冠茸毛，可以随风飘扬，繁衍后代，繁衍能力很强。
        蒲公英气微，味微苦。具有清热解毒，消肿散结，利尿通淋等药物功效。可用于治疗疔疮肿毒，乳痈，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛等多种病症。
        蒲公英中含有多种药物成分和营养成分，其中含量较低的咖啡酸(C₉H₈O₄)具有很好药物疗效，下面我们就采用高效液相色谱法来检测药材蒲公英中咖啡酸含量。
实验部分
【原理】
        精密称取适量蒲公英样品经5％甲酸的甲醇溶液溶解，超声提取，离心、过滤等操作后注入高效液相色谱系统，C18色谱柱分离，紫外检测器检测，外标法（保留时间定性，峰面积定量）计算，得出咖啡酸成分含量。
【仪器及试剂】
        仪器：高效液相色谱仪（紫外检测器+等度泵+柱温箱+自动进样器+在线脱气机等），超声波清洗仪，溶剂过滤器，电子天平（0.0001），离心机（转速不低于4000r/min）等。
        试剂：甲醇（色谱纯），甲酸（分析纯），磷酸（分析纯），磷酸二氢钠（分析纯），超纯水等。
【样品制备】
        对照品溶液制备：准确称取咖啡酸对照品2mg于50ml容量瓶中，加甲醇溶解、定容，制成40μg/ml咖啡酸对照品溶液，备用。
        供试品溶液制备：取蒲公英药材适量，准确称取粗粉1g，置于50ml具塞锥形瓶中，精密加入5％甲酸的甲醇溶液10ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理约30分钟后，取出，放冷，再次称定重量，用5％甲酸的甲醇溶液补足减少的重量，摇匀，离心机离心后，取上清液，0.45um有机相微膜滤过，存储于棕色容量瓶中，待测。
【色谱条件】
检测器：紫外检测器
检测波长：323nm
色谱柱：Promosil C18( 250 mm X4.6mm，5μm )色谱柱
流动相：甲醇：磷酸盐缓冲液(准确称取磷酸二氢钠1.56g于1000ml容量瓶中，加水溶解定容，用1％磷酸溶液调节pH值至3.9左右)=25：75（V：V）
流速：1.0ml/min
柱温：40℃
进样量：10μl
【色谱图】
对照品溶液色谱图：

供试品溶液色谱图：


【结果】


        经以上公式计算该蒲公英药材中咖啡酸含量为0.025%，含量较高，高于药典限量要求（药典中要求该含量不得少于0.020％）。
【结论】
        经重复性、线性、加标回收率等实验验证，该实验方法都具有良好的验证数据。
        该检测方法具有检测时间短，分离度好，操作简练，实验数据准确、可靠的优点，适合该样品检测，是该样品检测较为理想的方法。