主题：【分享】峰过载（液相）

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发表于：2021/09/20 20:29:51 楼主管理分享倒序浏览只看楼主回复私聊

当我增加样品量的时候，峰就变得拖尾和展宽，我样品的浓度相当低，因此，不会期望峰过载，如果你能讨论一下可能导致这样一个事件的现象，我会不胜感激的。

柱的质量过载只是由于增加进样量而导致峰变形的现象之一。这优肯是流动相是过载的，如果样品没有在流动相中完全溶解，那就有可能发生这样的事情，然而，让我们首先讨论色谱柱质量过载。

色谱柱的质量过载也可以快速的诊断出来，对于平常的分析，色谱柱的质量过载指的是柱体积的每平方毫米上面的进样量在0.1mg-1mg，如果你使用紫外检测器，你可以使用其他的规则，对于大多数具有强紫外吸收的分析物，当峰值高度达到约0.1AUFS时，质量过载就会开始了，当然，这些规则都是粗略的经验法则，但是如果你的进样量很少很少，那质量过载发生的概率就微乎其微

确实，样品的进样量应该更少，但是，我不认为质量过载造成峰型差，还有其他原因导致吗？

一个常见的问题是溶解样品的溶剂，如果溶解样品的溶剂的洗脱能力比流相大的很多,那么峰型差就会发生，这其中有几个原因，样品可能需要在固相提取过程得到，它需要比流动相更强的溶剂，在这种情况下，更换较弱的洗脱机稀释样品就可以解决这个问题，或者，可以将样品蒸发到干燥，然后在移动相或较弱的洗路液中重新稀释，溶解测试产生的样品也引起了类似的问题。样品中的酸可能会使流动相的缓冲区超载，并导致峰型差，这个可以通过调节样品的pH或者在流动相中使用更强的缓冲盐，为了制备更强的缓冲区，增加其浓度并将pH调整到接近缓冲区的pKa的值，这需要一点基本功底，但相对简单。在大多数检测中，样品中分析物的数量非常少，通常只是感兴趣的化合物加上内部标准。

如果样品的pH值是峰畸变的原因，那么缓冲液浓度的简单增加通常是溶液的原因，即使色谱图相当稳定很拥挤。通常，即使缓冲液浓度发生显著变化，保留率的变化也很小。当然，你应该检查缓冲液开始沉淀的浓度。

峰畸变问题的另一个原因是样品在流动相中的溶解度低。其效果类似于样品溶解在不同溶剂中的情况。毕竟，样品溶解在不同于流动相的溶剂中，以解决溶解度低的问题。幸运的是，这种情况是真正的问题是非常罕见的。在这种情况下，最好的方法可能是解决问题，这意味着可以确定样品浓度的浓度范围相当窄。或者，选择完全不同的色谱模式可以提供解决方案。

问：这些问题似乎都不适用。剩下什么？

答：我们尚未讨论的一个项目是简单的样本卷过载。如果样品溶解在流动相中，注入大量样品，则峰变宽。这种现象对早期洗脱峰的影响较大，对晚期洗脱峰的影响较小。我们可以用这个标准来区分这个问题和我们讨论过的其他问题。溶液相当简单：将样品溶解在比流动相弱的洗脱溶剂中。如果这是个问题，你可以很快检查。用流动相中较弱的洗脱液稀释样品2倍，然后注入2倍于样品体积的溶液。这将使样品集中在柱顶部，样品总量保持不变。如果峰值失真消失，简单的体积过载就是问题所在。只需在将来将样品溶解在洗脱强度较低的溶剂成分中，问题就会消失。仔细考虑样品溶剂对分析结果的影响可以解决许多问题。

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