选用亲水性的核苷/核酸碱基类物质考察了Sil-SMA-MME色谱柱的分离性能。如图，使用乙腈-水（94:6，v/v）作为流动相对待测样品进行洗脱，在8 min以内，尿苷、尿嘧啶和肌苷三种物质可以达到基线分离（a），色谱图峰型良好，三物质的理论塔板数均大于60,000 N/m。采用SiO₂-NH₂色谱柱对以上三种物质进行分离，在相同的流动相条件下，SiO₂-NH₂色谱柱对于核苷/核酸碱基类物质的保留更强，15 min之内只有尿嘧啶出峰（图b）。不断调节流动相中ACN和H₂O的比例，选用流动相乙腈-水（60:40，v/v）时，三种物质中保留时间最长的肌苷与在Sil-SMA-MME柱上的保留时间基本一致，三种物也可以达到基线分离，但尿嘧啶和尿苷的分离度仅1.62。

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核苷/核酸碱基类物质在Sil-SMA-MME色谱柱（a）和SiO₂-NH₂柱（b，c）中的分离色谱图

色谱条件：图a和b流动相为乙腈-水（94:6，v/v），图c流动相为乙腈-水（60:40，v/v）；检测波长，214 nm；流速，1.0 mL/min

分析物：1. 尿嘧啶；2. 尿苷；3. 肌苷

Separation chromatograms of nucleosides and nucleic acid bases on the Sil-SMA-MME column (a) and commercial amino column (b, c)

Chromatographic conditions: mobile phase, ACN-H₂O (94:6, v/v) for a and b, ACN-H₂O (60:40, v/v) for c; detection wavelength, 214 nm; flow rate, 1.0 mL/min

Analytes: 1. uracil; 2. uridine; 3. inosine

Sil-SMA-MME色谱柱分离苯酚类化合物

最后，选取四种苯酚类小分子物质对Sil-SMA-MME色谱柱的分离性能进行考察。为对乙酰氨基酚、对甲酚、对氯苯酚和4-叔辛基苯酚的色谱分离图。以流动相乙腈-水（40:60，v/v）进行洗脱，四种物质在6 min之内可以实现基线分离，色谱图峰型良好，四种物质的理论塔板数均大于55,000 N/m。采用SiO₂-NH₂色谱柱对以上四种物质进行分离，在相同的流动相条件下，SiO₂-NH₂色谱柱对于苯酚类物质的保留更弱，对乙酰氨基酚和对甲酚色谱峰完全重叠，对氯苯酚和4-叔辛基苯酚也无法达到基线分离。调节流动相比例，使保留时间最长的4-叔辛基苯酚与在Sil-SMA-MME色谱柱上保留时间基本一致，此时，流动相为乙腈-水（97:3，v/v），四种物质可以达到基线分离，但分离选择性与在Sil-SMA-MME色谱柱上有显著差异。

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苯酚类物质在Sil-SMA-MME色谱柱（a）和SiO₂-NH₂柱（b，c）中的分离色谱图

色谱条件：图a和b流动相为乙腈-水（40:60，v/v），图c流动相为乙腈-水（97:3，v/v）；检测波长，214 nm；流速，1.0 mL/min

分析物：1. 对乙酰氨基酚；2. 对甲酚；3.对氯苯酚；4. 4-叔辛基苯酚

Separation chromatograms of phenols on the Sil-SMA-MME column (a) and commercial amino column (b, c)

Chromatographic conditions: mobile phase, ACN-H₂O (40:60, v/v) for a and b, ACN-H₂O (97:3, v/v) for c; detection wavelength, 214 nm; flow rate, 1.0 mL/min

Analytes: 1. acetaminophen; 2. p-cresol; 3. p-chlorophenol; 4. 4-tert-octylphenol

小结

采用苯乙烯和马来酸酐作为单体原材料，通过“点击”反应与自由基聚合反应将苯乙烯-马来酸酐共聚物接枝在硅胶表面，然后通过亲核开环反应，用MME·HCl对共聚物中的马来酸酐基团进行开环修饰，制备了Sil-SMA-MME色谱固定相材料。采用热重分析和红外光谱分析证明了Sil-SMA-MME固定相的成功制备。Sil-SMA-MME色谱柱具有亲水相互作用保留机制。通过小分子物质，对Sil-SMA-MME色谱柱的分离性能进行考察，结果显示该色谱柱具有良好的分离选择性和较高的理论塔板数，有望进一步用于磷脂的分离分析。

附件：

6Sil-SMA-MME色谱柱分离核苷核酸碱基类化合物及苯酚类化合物.docx